بررسی میزان ویروس پاپیلوما در بافت سرطانی سلولهای مخاطی حفره دهان و مقایسه عفونت در افراد سالم و بیمار

مقدمه: پاپیلوما ویروس ها ویروس های کوچکی هستند،که در هسته سلولهای اپی تلیال سنگفرشی تکثیر می یابند. پاپیلوماویروس ها طیف گسترده ای از بیماری را ایجاد می کنند. از جمله بیماری هایی که توسط این ویروس ها ایجاد می شود عبارتند از عفونت های پوستی و عفونت های حفره دهانی و عفونت های مجاری تنفسی و غیره را ایجاد می کنند. سرطان دهان یک مشکل بهداشتی جهان و بیماری شایع درحال افزایش می باشد. این بیماری خیلی نگران کننده است و شیوع سرطان دهان روز به روز در حال افزایش می باشد. تشخیص به موقع سرطان دهان باعث پیشگیری از این بیماری می شود.هدف: شناسایی و ردیابی ویروس پاپیلوما در افراد مبتلا به سرطان سلولهای مخاطی حفره دهان مواد و روشها: در این پژوهش از 50 نفر فرد بیمار و 10 نفر فرد سالم به عنوان شاهد نمونه گیری انجام شد بعد استخراج dna نمونه ها با روش دستی فنل-کلروفرم، سپس پرایمرهای برای تکثیر e6 یا e7 با روش oligo 7 وalleleid 6 و mega 4 طراحی نمودیم. سپس پرایمرهای مورد نظر با کنترل مثبت با روش pcr set up نمودیم. در مرحله بعد برای تعیین حساسیت روش pcr، قطعات تکثیر شده مربوط به تیپ های پاپیلوماویروس های 16،18،11و6 را درون t/a وکتورکلون کرده و سپس درون باکتریtop10 ترانسفورم نمودیم و پس از انجام کلنی pcr و تایید حضور قطعه مورد نظر در کلنی اقدام به تخلیص پلاسمید با استفاده از کیت mini prep نمودیم. پس از محاسبه مقدار غلظت پلاسمید اقدام به تهیه serial dilution از وکتور های مورد نظر کردیم ،تا آخرین رقتی که انجام pcr بر روی آن همراه با مشاهده باند بر روی ژل می شد به عنوان آستانه یا حساسیت تست در نظر گرفته شد سپس تمام نمونه های بیماران با pcr از لحاظ وجود پاپیلوما ویروسهای 16،18،11 و6 به صورت جداگانه مورد آزمایش قرار گرفت. سپس با روش real time pcr تیتر ویروسی 50 نمونه را بدست آوردیم. نتایج: از مجموع 50 بیمار که سرطان دهان داشتند در این پژوهش از لحاظ وجود پاپیلوما ویروسهای 16،18،11 و6 مورد ارزیابی قرار گرفتند که از این 50 نفر 8نفر hpv11 مثبت و 10 نفر hpv18 مثبت بودند. تمام 10 نفر گروه کنترل از نظر hpv منفی بودند. نتیجه گیری: در این مطالعه حضور dna پاپیلوما ویروسهای 16،18،11 و 6 در بافت های سرطان دهان با روش real-time pcr مورد شناسایی قرار گرفت. و ارتباط احتمالی عفونت ویروس پاپیلومای انسانی در بروز و تکامل بدخیمی های دهان مورد تایید قرار گرفت. واژگان کلیدی:پاپیلوما ویروس ها ، سرطان دهان ،real-time pcr