جداسازی، خالص¬سازی و تعیین ویژگی¬های بیوشیمیایی آنزیم لیپواکسیژناز از دانه کنجد (sesamum indicum) sesame

در این پژوهش، آنزیم لیپواکسیژناز (lox) از دانه کنجد sesame(sesamum indicum) با استفاده از روش¬های رسوب¬دهی با سولفات آمونیوم و روش¬های کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون و تبادل یونی-q سفاروز خالص شد. در پایان مراحل خالص¬سازی، فعالیت ویژه آنزیم 4/159 و ضریب خالص¬سازی برابر 4/246 به دست آمد. وزن مولکولی این آنزیم براساس روش sds-page حدود 3/66 کیلودالتون محاسبه گردید. براساس نتایج گرفته شده، ph بهینه آنزیم 8 به دست آمد و آنزیم در دمای ?c 35 بیشترین فعالیت و پایداری را از خود نشان داد. اثر برخی یون¬ها شامل +2mg،+2ca، +2mn، +2 co،+ 2 zn، +2 feو na+بر روی فعالیت lox نشان داد که +2 feو+ 2 caبه ترتیب با 160 % و 141% بیشترین اثر را بر فعال¬سازی آنزیم داشتند و +2co با 20% فعالیت نسبی بیشترین اثر مهاری را بر فعالیت لیپواکسیژناز داشت. اثر sds (سدیم دودسیل سولفات)، 100, triton-x ctab (ستیل تری متیل آمونیوم بروماید) و بتا-مرکاپتواتانول بر فعالیتlox بررسی شد. فعالیت آنزیم در حضور غلظت¬های 5/1 میلی¬مولارctab و بتا- مرکاپتواتانول کاهش یافت. غلظت 5/2 میلی-مولارpmsf به میزان بسیار اندک باعث کاهش فعالیت گردید. غلظت 5/2 میلی¬مولارedta (اتیلن دی آمین تترا استیک اسید) سبب مهار قابل توجه lox شد. ترکیب 1و10- فنانترولین توانست سبب کاهش فعالیت آنزیم شود. در مجموع حلال‏های آلی10 و 20 درصد (v/v) موجب کاهش فعالیت آنزیم lox شدند. پارامترهای سینتیکی km و vmaxبرای سوبسترای لینولئیک اسید به ترتیب ?m010/1،m/min ? 054/0 به دست آمد. مقادیر 50ic مهارکننده های آنزیم لیپواکسیژناز شامل: پتاسیم سیانید (270 میکرو¬مولار)، بتا-کاروتن (48 میکرو¬مولار) و اسید آسکوربیک (132 میکرو¬مولار) محاسبه شد. بر این اساس، از آنزیم لیپواکسیژناز جدا شده از گیاه کنجد ممکن است از دیدگاه علوم پایه در درک بیشتر سازوکار آنزیم¬های اکسیدوردوکتاز و از دیدگاه کاربردی، در حفظ و نگه¬داری مواد غذایی استفاده کرد.