ایجاد رده سلولی از سلول های بنیادی پالپ دندان انسان القاپذیر با داکسی سایکلین برای ژن های کلون شده در وکتور ptre2hyg
پایان نامه
- 0
- نویسنده نسیمه کرم زاده
- استاد راهنما محمد مهدی یعقوبی
- سال انتشار 1393
چکیده
ژن درمانی یک روش درمانی نوین و امیدوار کننده برای درمان و مدیریت مجموعه گوناگونی از بیماری های ژنتیکی و غیر ژنتیکی است. این فناوری برای ارائه یک درمان مطلوب، موثر و طولانی مدت، به پیشرفت در مهندسی وکتورهای ژنی و سیستم های تنظیم ژن برای تسهیل و کنترل بیان ژن نیاز دارد. چرا که بیان همیشگی ژن مورد نظر در بافت نه تنها مفید نیست بلکه بیان نابجا مضر هم هست. سلول های بنیادی پالپ دندان منبع مناسبی از سلول های بنیادی بالغ برای سلول درمانی و ژن درمانی برای ترمیم ضایعات مختلف هستند. یکی از سیستم های قابل تنظیم بیان ژن کلون شده، سیستم tet مبتنی بر اپران مقاومت tn10 tet از باکتری escherichia. coliاست. جزء اولیه سیستم tet، پروتئین تنظیمی مبتنی بر مهار کننده* tetrاست. جزء مهم دیگر آن پلاسمید پاسخ (ptre) است که ژن مورد نظر را تحت کنترل عنصر پاسخ به داکسی سایکلین بیان می کند. این دو جزء در دو پلاسمید جداگانه (ptet-on و ptre2hyg) در دسترس هستند. هدف این پژوهش ایجاد رده سلولی جدید از سلول های بنیادی پالپ دندان انسان القاپذیر با داکسی سایکلین برای ژن های کلون شده در وکتور ptre2hyg با استفاده از سیتسم tet-on بود. پس از جداسازی سلول-های بنیادی پالپ دندان، پلاسمید های ptet-on و ptre2hyg جداگانه و با استفاده از روش های مختلف مانند کلسیم فسفات و استفاده از کیت ترانسفکشن، وارد سلول شدند. برای هر پلاسمید سلول به مدت 2-4 هفته روی محیط آنتی بیوتیک دار مناسب (به ترتیب نئومایسین و هیگرومایسین) کشت داده شد تا کولونی های مقاوم رشد کنند. کولونی هایی که روی هر دو آنتی بیوتیک رشد کرده بودند با داکسی سایکلین القاء شدند. سپس از روش های , pcr rt-pcr و استخراج پروتئین برای اثبات وارد شدن پلاسمید و القای آن استفاده گردید. نتایج حاصل از rt-pcrو pcrنشان دادکه پلاسمید تنظیمی ptet-on به صورت موفقیت آمیز وارد سلول شده است و بیان هم می شود. در مراحل اولیه و با استفاده از کشت حاوی آنتی بیوتیک انتخابی وارد شدن پلاسمید پاسخ حامل ژن مورد نظر به سلول مشخص شد، اما نتایج استخراج پروتئین بیان ژن مورد نظر را تایید ننمود.
منابع مشابه
اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملجداسازی، تعیین هویت و ذخیره استاندارد سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی و پالپ دندان انسان
Background: Due to extensive use of cell cultures in biomedical investigations and researches, there has been a great need to identify, authenticize and accurate quality control of cells. Stem cells are characterized by their self-renewal and differentiation potential. Mesenchymal stem cells are found in various tissues. These cells are vastly used in cell therapy and regenerative medicine and ...
متن کاملبهبود تمایز نوروگلیال از سلول های بنیادی پالپ دندان انسانی توسط مایع مغزی-نخاعی
Background and purpose: Cerebrospinal fluid (CSF) has a broad set of molecules which is essential for neurogenesis. Human dental pulp stem cells (hDPSCs) are putatively neural crest cell-derived that can differentiate into neurons and glial cells under appropriate neurotrophic factors. The aim of this study was to induce differentiation of hDPSCs into neuroglial phenotypes using Retinoic acid (...
متن کاملبررسی میزان بیان mrna گیرنده های نوروتروفین ها در سلول های بنیادی پالپ دندان انسان
مطالعات اخیر به خوبی نشان داده اند که سلول های بنیادی عصبی می توانند از بافت مغز و مغز استخوان به دست آیند، اما دسترسی به این بافت ها بسیار مشکل می باشد و جداسازی این سلول ها از منبع قابل دسترس، می تواند گام بزرگی را در پیشبرد پزشکی مدرن و در جهت بهبود بیماری های تخریب کننده عصبی بردارد. مطالعات اخیر نشان داده اند که سلول های بنیادی عصبی می توانند در پالپ دندان، مشابه دستگاه عصبی مرکزی و مغز ...
15 صفحه اولمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
0
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023