مهندسی ژنتیک ریزجلبک chlamydomonas reinhardtii به منظور بررسی پتانسیل تولید amorpha-4,11-diene پیش ساز عامل ضد مالاریایی آرتمیزنین

پایان نامه
چکیده

مالاریا بیماری خطرناکی است که بیش از یک سوم جمعیت کره زمین را تهدید می کند و امروزه از آرتمیزنین و مشتقات آن به عنوان مهم ترین داروی ضد مالاریا استفاده می شود. آرتمیزنین یک سسکوئی ترپن اندپروکسیدی می باشد که به میزان بسیار اندک در گیاه artemisia annua تولید می شود. برای دستیابی به تولید بیشتر این متابولیت ارزشمند از روش های مهندسی ژنتیک استفاده شده و از آن جا که ریزجلبک ها قابلیت استفاده به عنوان یک سکوی مناسب تولید فرآورده های نوترکیب می باشند، این تحقیق با هدف مهندسی ژنتیک جلبک به منظور بررسی تولید آمورفا دی ان، پیش ساز آرتمیزنین پایه گذاری و انجام شد. این مطالعه در دو آزمایش مورد بررسی قرار گرفت. در مرحله نخست دو ژن کلیدی ads و fpps، از مسیر بیوسنتزی این متابولیت انتخاب و بر اساس ترجیح کدونی کلروپلاست جلبک کلامیدوموناس و سازه کلروپلاستی طراحی شده، سنتز شدند. در آزمایش اول به منظور تراریزش هسته ای، ژن ads داخل ناقل pbi121 همسانه سازی شد. پس از هم کشتی کلامیدوموناس با نژادهای آگروباکتریوم حاوی ناقل pbi121-ads کلون های تراریخت جلبک مشاهده شد. در این آزمایش تعداد کلون های مشاهده شده در محیط گزینشی در هم کشتی با نژاد gv3101 بیش از نژادlba4404 بود. همچنین در این آزمایش بیان پایداری در انتقال با آگروباکتریوم مشاهده نشد و کلون ها بعد از چند روز رشد در محیط گزینشی از بین رفتند. ناپایداری بیان می تواند در نتیجه عدم استفاده از عناصر تنظیمی مناسب جلبک، عدم وجود بهینه سازی کدونی برای هسته و احتمالاً وجود بیان موقت انتقال با آگروباکتریوم باشد. در آزمایش دوم نخست سازه کلروپلاستی طراحی شده سنتز شد. برای این منظور ناحیه 3utr ژن rbcl در انتهای ژن fpps و پیشبر atpa در ابتدای ژن ads قرار گرفت. سپس دو ژن سنتزی و عناصر تنظیمی همراه آنها درکنار یکدیگر قرار گرفته و کاست بیانی موردنظر بدست آمد. در مرحله بعد این کاست بیانی در داخل ناحیه fr(flanking region) ژنوم کلروپلاست کلامیدوموناس قرار گرفت. سپس ناقل کلروپلاستی ایجاد شده از طریق تفنگ ژنی به ریز جلبک کلامیوموناس شلیک شد. تعداد کلون های بدست آمده از طریق شلیک با تفنگ ژنی بسیار کم بود و بین این کلون ها تنها در دو کلون نتایج pcr و rt-pcr آنها مثبت بود. بررسی میزان تولید متابولیت موردنظر در کلون های تراریخت در حال بررسی می باشد.

منابع مشابه

evaluation of agrobacterium-mediated transformation of chlamydomonas reinhardtii using a synthetic amorpha-4, 11-diene synthase gene

amorpha-4,11-diene synthase (ads) is a key enzyme in biochemical pathway of the antimalarial agent artemisinin. an agrobacterium-mediated transformation was carried out to express a synthetic ads gene in green microalga chlamydomonas reinhardtii strain 125c with bacterial strains gv3101 and lba4404. the foreign gene was optimized based on codon usage bias of the microalga. integration of the ad...

متن کامل

Chlamydomonas reinhardtii

A mutation at the PFlO locus of the unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii leads to abnormal cell motility. The asymmetric form of the ciliary beat stroke characteristic of wild-type flagella is modified by this mutation to a nearly symmetric beat. We report here that this abnormal motility is a conditional phenotype that depends on light intensity. In the absence of light or under lo...

متن کامل

Selenoprotein-Transgenic Chlamydomonas reinhardtii

Selenium (Se) deficiency is associated with the occurrence of many diseases. However, excessive Se supplementation, especially with inorganic Se, can result in toxicity. Selenoproteins are the major forms of Se in vivo to exert its biological function. Expression of those selenoproteins, especially with the application of a newly developed system, is thus very important for studying the me...

متن کامل

Chemoresponses of Chlamydomonas reinhardtii.

Cells of Chlamydomonas reinhardtii have been found to respond to chemicals in two ways: chemokinesis and chemotaxis. Several amino acids, fatty acids, and inorganic salts can stimulate these responses.

متن کامل

Phototaxis in Chlamydomonas Reinhardtii

Parameters which distinguish phototaxis from random motility in Chlamydomonas reinhardtii have been defined with quantitative assays. The phototactic responses in photosynthetic, mixotrophic, and heterotrophic cultures were highest during exponential growth and declined rapidly as the cultures entered stationary phase. In contrast, random motility was relatively constant throughout growth. Phot...

متن کامل

مهندسی ژنتیک ریزجلبک بمنظور تولید واکسن هپاتیت b

امروزه تولید فراورده های دارویی به صورت نوترکیب در سیستم های یوکاریوتیک از اهمیت به سزایی برخوردار گردیده است. ریز جلبک های سبز به عنوان کوچک ترین واحد های یوکاریوتیک که قابلیت فتوسنتز دارند و در محیط های کشت ساده رشد می کنند، برای کشاورزی مولکولی قابل استفاده می باشند. دراین تحقیق قابلیت استفاده از ریز جلبک های دونالیلا و کلورلا برای تولید و بیان آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت b مورد بررسی قرار می ...

15 صفحه اول

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی

کلمات کلیدی

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023