تاثیر غلظت کمتر از مهارکننده آمپی سیلین، ونکومایسین، جنتامایسین و سفتی زوکسیم در بیان ژن های کلونیزاسیون انتروکوکوس فکالیس ایزوله شده از نمونه کلینیکی در شرایط in- vitro

زمینه و اهداف: انتروکوکوس ها کوکسی های گرم مثبتی هستند که جزء خانواده گروه d استرپتوکوکوس ها طبقه بندی می شوند.این باکتری ها از عوامل اصلی عفونت های بیمارستانی همچون باکتریمی، عفونت دستگاه ادراری و اندوکاردیت شناخته می شود. در این مطالعه ما به بررسی حضور ژن های بیماری زای مرتبط با کلونیزاسیون پرداخته و تاثیر آنتی بیوتیک های آمپی سیلین، جنتامایسین، سفتی زوکسیم و ونکومایسین بر بیان ژن های کلونیزاسیون و تشکیل بیوفیلم این باکتری مورد بررسی قرار دادیم. روش بررسی: در مجموع 201 سویه کلینیکی انتروکوکوس از بیمارستان های مختلف در سطح کشور جمع آوری و با استفاده از آزمون های بیوشیمیایی، ملکولی و اسپکتروفتومتری مورد شناسایی قرار گرفتند با استفاده از آزمون pcr حضور ژن های بیماری زای asa, ace, ebp, efa, esp, gel, cyl, hyl مورد شناسایی قرار گرفتند و پروفایل میکروبی برای هر کدام از سویه های کلینیکی بدست آمد. براین اساس سویه انتروکوکوس فکالیس 1925 و انتروکوکوس فسیوم 2653 به عنوان سویه های مناسب به جهت داشتن تمامی ژن های بیماری زا و الگوی مقاومت انتخاب شدند. جهت بررسی تاثیر آنتی بیوتیک ها در بیان ژن های کلونیزاسیون، غلظت کمتر از مهارکننده آنتی بیوتیک ها برای سویه های مورد مطالعه تعیین گردید. جهت بررسی تاثیر غلظت های کمتر از مهار کننده آنتی بیوتیک در بیان ژن ها باکتری ها بر اساس پروتکل استاندارد به فاز تصاعدی رشد وارد نموده و با غلظت مشخص از آنتی بیوتیک مواجه و سپس rna سویه های مورد مطالعه استخراج شد. پس از حذف dna از سویه های مورد مطالعه و تولید cdna میزان بیان با استفاده از آزمون realtimepcr اندازه گیری شد و با اندازه گیری همزمان میزان بیان ژن کانزرو 23srrna و مقایسه تغییرات بیان با استفاده از فرمول فافل امکان تعیین تغییرات بیان ژن مهیا شد. همچنین تاثیر آنتی بیوتیک ها بر کلونیزاسیون و تشکیل بیوفیلم با استفاده از روش مایکروتیتر و روش جریان فلو (bioflux) انجام گردید تا تاثیر فنوتیپی آنتی بیوتیک ها در تشکیل بیوفیلم اندازه گیری گردد. نتایج : در مجموع 114ایزوله (7/56%) انتروکوکوس فکالیس و 87(2/43%) ایزوله به عنوان انتروکوکوس فسیوم شناسائی شدند. خصوصیات بیوشیمیایی، الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی، حضور ژن های مقاومت و حضور تک تک ژن های بیماری زا در سویه ها جداشده مورد بررسی و شناسایی قرار گرفت و بر این اساس پروفایل کامل تمام سویه ها تهیه شد. تغییرات بیان ژن ها در مواجه با آنتی بیوتیک ها بدین شرح بود. آمپی سیلین باعث افزایش بیان ژن های ebp, esp و ace شد در حالی که تاثیر کاهنده بر efa و asa داشت. جنتامایسین با تاثیر بر esp, ebp و efa باعث افزایش بیان آن ها و به موازات آن کاهش بیان asa, ace شد، سفتی زوکسیم بر تمامی ژن های مورد بررسی تاثیر کاهنده و بر روی ebp بی تاثیر بود. ونکومایسین علیرغم اثر افزاینده بالا بر بیان esp بر سایر ژن ها اثر کاهنده داشت. نتیجه گیری: در این مطالعه روش تشخیصی maldi-tof بهترین روش شناسایی ایزوله ها شناخته شد. حضور ژن های ویرولانس در ایزوله های انتروکوکوس فکالیس بطور معنی داری بیش از ایزوله های انتروکوکوس فسیوم بود در حالیکه مقاومت آنتی بیوتیکی ایزوله هایانتروکوکوس فسیوم بیش از انتروکوکوس فکالیس بود. تاثیر آنتی بیوتیک ها در بیان ژن های کلونیزاسیون مشابه نتایج مطالعات استرس فاکتورهای دیگر در بیان ژن های مرتبط با کلونیزاسیون متغییر بود و غالبا همراه با کاهش بیان فاکتورهای دخیل در کونژوگاسیون و افزایش پروتئین های اتصالی سطحی بود. بررسی تاثیر فنوتیپی آنتی بیوتیک ها نشان داد آنتی بیوتیک جنتامایسین قادر است در غلظت های خاص باعث افزایش کلونیزاسیون و تشکیل بیوفیلم گردد. این تاثیر در سویه های فاقد ژن های ویرولانس نیز مشاهده شد که نشان از دخالت ژن هایی غیر از ژن های معرفی شده در کلونیزاسیون این باکتری می باشد که این یافته می تواند راهگشای شناسایی ژن های جدید و شناخت بهتر مکانیسم بیماری زایی این باکتری باشد.