همسانه سازی و بیان آنزیم لیپاز باکتری ترموفیل بومی cohnella sp. a01

لیپازها یکی از مهمترین گروه های کاتالیزورهای زیستی می باشند که در صنایع مختلفی کاربرد دارند. باکتری ترموفیل بومی cohnella sp. a01 دارای دمای بهینه رشد 60 درجه سانتی گراد می باشد. انتظار می رود که لیپاز این باکتری پایداری دمایی بالایی داشته باشد و بتوان از آن در صنایعی مثل صنایع شوینده و چرم سازی استفاده کرد. بنابراین در این مطالعه، ژن لیپاز باکتری cohnella sp. a01 در حامل بیانی pet 26 b (+) همسانه سازی گردید و بیان پروتئینی آن، در باکتری اشریشیاکولی (de3) صورت گرفت. تخلیص پروتئین با استفاده از ستون تعویض یونی با راندمان 38% انجام گرفت. در مرحله بعد خصوصیات ساختاری و عملکردی آنزیم مورد بررسی قرار گرفت. خصوصیات عملکردی آنزیم با استفاده از پارانیتروفنیل پالمیتات بررسی شد. آنزیم بیش ترین فعالیت را در دمای 70 درجه سانتی گراد (ph 8/5) دارا می باشد. مطالعه سوبسترایی نشان داد که آنزیم بیش ترین فعالیت را به ترتیب در حضور سوبستراهای 4 کربنه، 18 کربنه، 16 کربنه و 6 کربنه دارد که فعالیت هیدرولیز سوبسترای 18 و 16 کربنه نشان می دهد که این آنزیم، یک لیپاز حقیقی می باشد. آنزیم در حضور اکثر یون های فلزی، حلال های آلی و شوینده ها از فعالیت بالایی برخوردار می باشد و برای فعالیت نیازی به کوفاکتور ندارد. حالت مولتن گلبول با تکنیک های دورنگ نمایی دورانی، فلورسانس ذاتی، فلورسانس خارجی، خاموش سازی فلورسانس و اثر ph بر حجم آنزیم مورد ارزیابی قرار گرفت. درصد ساختارهای ثانویه با دورنگ نمایی دورانی برابر با: 37/5% آلفا هلیکس، 12/8% صفحه بتا، 22/7% پیچه بتا و 27% پیچه نامنظم بدست آمد.