تغییر بیان آندوژن ژن ساکس2 در سلول های فیبروبلاست گاوی با استفاده از تال افکتورها
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی
- نویسنده یاسمن شمشیرگران
- استاد راهنما مجتبی طهمورث پور حسام دهقانی
- سال انتشار 1392
چکیده
اهداف مطالعه حاضر عبارت بودند از: الف) تست فعالیت تال افکتورهای مصنوعی در سلول-های گاوی و استفاده از آن ها جهت افزایش بیان ژن ساکس2 ، ب) توسعه روشی جهت مهندسی تال افکتورهای واجد عملکرد در سلول های پستانداران و پ) بررسی اثر سینرژتیک چندین تال افکتور. در آزمایش اول از یک تال افکتور قبلاً به کار برده شده جهت افزایش بیان ژن ساکس 2 انسانی جهت افزایش بیان ژن ساکس2 گاوی استفاده شد. نتایج آنالیز کمی بیان ژن نشان داد که تال افکتورها در سلول های فیبروبلاست گاوی دارای عملکرد هستند و میزان بیان ژن ساکس2 گاوی در نتیجه عملکرد تال افکتور ذکر شده با موفقیت به بیش از سه برابر افزایش یافت. در آزمایش دوم روش golden-gate cloning که جهت ساخت تالن ها به فراوانی استفاده شده بود، جهت ساخت تال افکتورها با دامین فعال کننده بیان ژن (vp64) توسعه یافت. به این منظور یک پلاسمید انتهایی سازگار با این روش حاوی یک کاست nls-vp64-2a-egfp ساخته شد و با استفاده از آن چهار تال افکتور جدید جهت هدف گیری مناطق اطراف نقطه شروع نسخه برداری ژن ساکس2 ساخته شد. به منظور نشان دادن واجد عملکرد بودن تال افکتورهای ساخته شده در سلول های پستانداران، یک سیستم گزارشگر بر اساس پروتئین فلورسنت mcherry جهت تست فعالیت یکی از تال افکتورهای مهندسی شده در سلول های hek293 توسعه داده شد. سلول های ترانسفکت شده با پلاسمیدهای کد کننده تال افکتور و گزارشگر که هر دو پلاسمید را دریافت کرده بودند دارای سیگنال قوی تری از فلورسنت بودند که نشان دهنده واجد عملکرد بودن تال افکتور مهندسی شده در سلول های hek293 بود. در آزمایش سوم مناطق کد کننده چهار تال افکتور مهندسی شده برای هدف گیری ژن ساکس2 گاوی در یک ناقل رتروویروسی (pmxs) کلون شدند و با استفاده از ترانسفکشن همزمان با پلاسمید pvsv-g در سلول های hek293-gp2، رتروویروس های حاوی تال افکتورها تولید شد. برای هر یک از 15 ترکیب های ممکن از چهار تال افکتور ساخته شده سه تکرار در نظر گرفته شد. نتایج فلوسیتومتری نشان داد رتروویروس ها یک ابزار با کارایی بسیار بالا جهت انتقال ژن به سلول-های فیبروبلاست گاوی هستند (81-94 درصد). نتایج آنالیز کمی بیان ژن ساکس2 نشان داد با استفاده از ترکیبی از تال افکتورها می توان بیان ژن ساکس2 را به صورت سینرژتیکی تا بیش از 5 برابر افزایش داد. این مطالعه اولین گزارش از به کاربردن تال افکتورها به منظور افزایش بیان ژن ها در سلول های حیوانات مزرعه ای است. تال افکتورها با توجه به سهولت ساخت و دارا بودن کارایی مناسب می توانند کاربردهای بسیاری در حیطه های مختلف علوم طبیعی از جمله بیوتکنولوژی کشاورزی داشته باشند.
منابع مشابه
بیان ژن TGF-β در سلول های فیبروبلاست راه هوایی مصدومین شیمیایی
مقدمه: استفاده گسترده از سولفور موستارد به عنوان جنگ افزار شیمیایی اثرات سمی طولانی مدتی به جای گذاشته است. بنابراین تمام متخصصان سلامت باید دانش کافی و آمادگی مقابله با هر گونه حمله شیمیایی مشابه را داشته باشند. فاکتور تغییر دهنده ی رشد (TGF-β) نقش مهمی در بیماری های مزمن راه هوایی، از جمله فرایند تغییر ساختار راه هوایی که منجر به انسداد راه هوایی می شود، ایفا می کند. این تغییرات مورفولوژیک در...
متن کاملافزایش بیان اختصاصی ژن Cdk9 بوسیله microRNA-1 بالغ تک رشته در سلول های فیبروبلاست
Abstract Background: MicroRNAs (miRNAs) are endogenous, non-coding short RNAs (~22 nt) that can downregulate gene expression by translational repression, mRNA degradation, or transcriptional repression. miRNA misregulation has been implicated in pathogenic alterations such as cancer. In order to investigate microRNA functions in gene regulation and/or to modulate their expression in pathogenic...
متن کاملتغییر بیان ژن SHIP2 (SH2 domain containing inositol 5-phosphatase) با استفاده از سیستم رتروویروس در سلول های کبدی HepG2
Introduction: Dyslypydmy is one of the risk factors of cardiovascular disease in diabetics. Dyslypydmy is diagnosed by increasing in plasma triglyceride density, decreasing HDL Cholesterol, and increasing LDL especially small LDL. Several evidences from human and animal studies indicate that the role of insulin resistance is a major cause of hypertrigly ceridemia in diabetics and people with me...
متن کاملآنالیز بیان افتراقی ژن ها در پاسخ به عصاره لیپوپلی ساکاریدی ازباکتری اشیرشیاکولای در سلول های اپی تلیال اندومتریوم گاوی
Lipopolysaccharide is a component of outer membrane of gram-negative bacteria involved in the pathogenic process leading to mastitis and metritis in dairy cattle. Additionally, LPS could be caused endometrium inflammation and implantation failure in many animal species. Based on economic importance of these diseases in dairy cattle industry, analysis of differential gene expression (DGE) and al...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023