بررسی اثرات ضدقارچی پروتئین حاصل از ژن sd2mod-licbm2 تولید شده در گیاه لوبیا

یکی از مشکلات بزرگ تولید محصولات کشاورزی بیماری?های گیاهی می?باشند که از گذشته دور همواره بر کمیت و کیفیت تغذیه انسان?ها اثر گذار بوده و باعث خسارت اقتصادی، زیست محیطی و سیاسی اجتماعی فراوانی شده اند.?????? بیماری های گیاهی ناشی از قارچ ها از عمده عوامل کاهش کیفیت و ایمنی محصولات کشاورزی هستند، که کنترل موثر و با دوام این نوع پاتوژن محصولات کشاورزی، تبدیل به یکی از چالش های عمده در کشاورزی مدرن شده است. دفنزین ها ی گیاهی پروتئین ها ی غنی از سیستئین هستند که یک نقش مهم دفاعی در مقابل پاتوژن ها ی گیاهی بازی می کنند. و به دلیل فعالیت ضد قارچی گسترده خود گزینه جذاب و امیدوار کننده هستند تا در بیوتکنولوژی کشاورزی مورد استفاده قرار گیرد. ???ساختار آمینواسیدی و فعالیت ها ی زیستی دفنزین ها از تنوع زیادی برخوردار می باشند و تفاوت ها ی کوچک در توالی آمینواسیدی، ساختار و تاثیر آن ها را در برابر پاتوژن ها دگرگون می سازد. ژنsd2mod یک ژن نوترکیب است، که بر اساس ژن دفنزین آفتابگردان sd2 ساخته شده است و در آن تغییراتی بر اساس توالی ژن دفنزین اسفناج (so-d2) اعمال شده است. در این مطالعه پلاسمید حامل ژن هیبرید از طریق تکنیک اگرواینفیلتریشن، تحت کنترل عناصر رونویسی متفاوت و در تیمارهای برگ سالم و برگ خراش داده شده و برگ اولیه(مسن) و برگ ثانویه (جوان) به داخل برگ های گیاه لوبیا انتقال داده شد و بعد از سه روز پروتئین تولید شده در برگ استخراج و اندازه گیری گردید. بهترین بیان در برگ خراش دیده جوان به علت مناسب بودن بافت برای اگرواینفیلتریشن و تحریک تولید فنول های محرک ژن های افزایش دهنده بیان در اثر زخم مشاهده شد. سپس اثر ضد میکروبی پروتئین سنتز شده از ژن sd2mod تحت سیستم یوکاریوتی بر روی عوامل بیماری زای گیاهی در محیط in vitro مورد بررسی قرار گرفت. اثر ضد میکروبی پروتئین سنتز شده از ژن sd2mod-licbm2 تحت سیستم یوکاریوتی بر روی قارچ های بیماریزای گیاهی fusarium oxysporum, fusarium solani, fusarium graminarum به خوبی مشاهده شد. پروتئین sdmod به خوبی اثر بازدارندگی را بر روی رشد هیف قارچ های گونه کلتوتریکوم شاملcolletotrichum acutatum و colletotrichum gloeosporioides نشان داد که حضور موثر پروتئین دفنزین را در ایجاد مقاومت قوی به این قارچ ها اثبات می کند. اثر ضد قارچی دفنزین sdmod با تغییر در مورفولوژی هیف قارچ fusarium graminarum که عبارت از تورم نوک هیف قارچ و اختلال هیفی و اسپور است همراه بود. در تطابق توالی اسیدآمینه ای دفنزین sd2mod با دفنزین های دیگر حضور اسید آمینه لیزین در ناحیه ی موثر ضد قارچی هسته موتیف ?، علت ایجاد تغییرات موفولوژی هیفی شناخته شد. این تحقیق از ژن دستکاری شده licbm2 به عنوان ژن مارکر استفاده شد همچنین اثرات ضد میکروبی برای این پروتئین بر روی برخی قارچ های مذکور مشاهد گردید.????????????????????????