بررسی شرایط بهینه در تهیه ی لنفوسیت های b نامیرا شده با استفاده از ویروس اپشتاین بار

هدف از انجام این آزمایش تهیه ی یک رده ی لنفوبلاستوئیدی از بیماران مبتلا به تالاسمی است چون این رده ی سلولی را می توان به مدت طولانی نگه داری کرد و انواع آزمایش هایی که در ارتباط با این بیماران است را بر روی آن انجام داد و به عنوان یک نمونه ی کنترل از آن استفاده کرد. و همچنین بررسی شرایط بهینه جهت رشد و تکثیر رده ی لنفوبلاستوئیدی به دست آمده می باشد . در این آزمایش از محیط کشت rpmi1640 ، سرم جنین گاوی (fbs) سیکلوسپورین آ با غلظت نهایی (ug / ml1) جهت جلوگیری از تکثیر لنفوسیت های تی سایتوتوکسیک، گلوتامین با غلظت نهایی (mm2) و آنتی بیوتیک های پنی سیلین u / ml100و استرپتومایسین mg / ml100 و در صورت نیاز می توان از لیپوپلی ساکارید (lps) به عنوان محرک رشد برای لنفوسیت های b نیز استفاده کرد (در صورت کم بودن تعداد لنفوسیت ها در محیط کشت)، سل لاین 8- 95 b ( گرفته شده از انستیتو پاستور ) جهت گرفتن ویروس اپشتاین بار استفاده شده است . همچنین از محلول فایکول برای جدا کردن لنفوسیت ها از خون استفاده می شود. در این پژوهش رده ی لنفوبلاستوئیدی از یک فرد مبتلا به بتا تالاسمی مینور به دست آوردیم این رده ی لنفوبلاستوئیدی در محیط کشت rpmi که شامل10% fbs، 1% گلوتامین mm200، 1% آنتی بیوتیک های پنی سیلین و استرپتو مایسین، سیکلوسپورین آ (ug/ ml1) و 5/0 تا cc1 از سوپ سل لاین b95 - 8که حاوی ویروس اپشتین بار است به دست آمده است. همچنین شرایط بهینه مانند (تغییرات دما ، تغییرات co2، تغییرات سرم و نوع محیط کشت) که برای رشد و تکثیر بهتر رده های لنفوبلاستوئیدی مناسب تر است را نیز بررسی شده است. در این قسمت بهترین مقدار دما، سرم، co2 و محیط کشتی که برای رشد و تکثیر بهتر رده ی لنفوبلاستو ئیدی مناسب تر است را بررسی کردیم و همچنین نتایجی را که به دست آوردیم با نتایج کارهای دیگر مقایسه شده است . رده های لنفوبلاستوئیدی در محیط کشت rpmi نسبت به محیط کشت dmem خیلی بهتر می توانند رشد کنند و تعداد آن ها افزایش یابد