بررسی بیان القایی ژنهای دفاعی تحت تیمار ماده محرک bth در به

این پزوهش در بخش کشت بافت و انتقال ژن، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران - کرج در سال 1392 انجام شد. بیماری آتشک که بوسیله باکتری erwinia amylovora ایجاد می شود، هر ساله عملکرد و کیفیت خانواده سیبیان را کاهش می دهد. هدف از این پژوهش جداسازی و بررسی بیان ژنهای دفاعی pr2, pr1 و pr8 با تحریک بیان آنها با ماده bth در مقاومت القایی در درخت به بود. بدین منظور درختچه های دو ساله به رقم اصفهان تحت تیمار با ماده bth قرار گرفت و 5 روز بعد rna از گیاهان تیمار شده و شاهد استخراج و از روی آن cdna ساخته شد. تکثیر ژنهای pr2, pr8 توسط آغازگرهای عمومی برای این ژنها، به وسیله واکنش pcr انجام گرفت. سپس به منظور توالی یابی، باندهای مورد انتظار پس از جداسازی از ژل روی ناقل ptz57r/t الحاق و پلاسمیدهای نوترکیب در باکتری اشرشیاکولای سویه xl1blue همسانه سازی گردیدند. dna پلاسمیدها استخراج شد و جهت توالی یابی مورد استفاده قرار گرفت. مقایسه توالیهای بدست آمده با سایر توالیهای موجود در بانک اطلاعات نشان داد که تشابه بالایی با ژنهای شناخته شده در سیب و گلابی دارند. برای بررسی بیان این ژن ها آغازگرهای اختصاصی طراحی شد. استفاده از این آغازگرها در واکنش زنجیره ای پلیمراز به تکثیر کارآمد قطعاتی با طولهای مورد انتظار منجر شد. سپس میزان بیان آنها از طریق واکنش real time pcr ارزیابی شد. نتایج نشان داد که بیان هر سه ژن مورد بررسی پس از تیمار گیاه با بیون، به میزان بالایی افزایش یافت.