جداسازی بیان و بررسی خصوصیات فیزیولوژیکی آنزیم بتا 1 و 3 -گلوکاناز از یونجه یکساله

پروتیین های مرتبط با بیماریزایی (pathogenesis-related prootein) ترکیبات پروتیینی هستند که توسط گیاه میزبانی در پاسخ به حمله عوامل بیماریزا یا تنشهای محیطی تولید می شوند این پروتیینها براساس توالی آمینواسیدی تفاوت های سرولوژیکی و تفاوت در فعالیت آنزیمی به 17 خانواده طبقه بندی شده اند. از میان پروتیین های مرتبط با بیماریزایی، بتا 1 و 3-گلوکاناز و کیتینازها بیشتر مطالعه شده اند علت این امر این است که بتا 1 و 3-گلوکانازها با شکستن باندهای بتا 1 و 3- گلوکان و کیتینازها با شکستن باندهای 1 و 4-n-استیل گلوکزآمین به طور مستقیم دیواره سلولی قارچها را هیدرولیز و از رشد قارچ جلوگیری می کنند. هدف از این تحقیق بیان فراوان و بررسی فعالیت فیزیولوژیک پروتیین های بتا 1 و 3- گلوکاناز در یونجه یکساله می باشد تا کنون بتا 1 و 3- گلوکانازهای زیادی در گیاهان مختلف شناسایی شده و خاصیت ضد قارچ آنها آزمایش شده است. در مطالعه ای که واتسون و همکاران روی یونجه یکساله انجام دادند سیصد و چهار پروتیین با تکنیک انگشت نگاری جرمی پپتید (peptide mass finger printing) شناسایی شد. در بین این پروتیین ها یک بتا 1 و 3-گلوکاناز با شماره bf650622 ثبت شد ولی تا کنون فعالیت بیولوژیکی آن بررسی نشده است. در این تحقیق با همردیف سازی ژن های بتا 1 و 3- گلوکاناز یونجه چندساله و نخود روی ژنوم یونجه یکساله سه چارچوب خواندن با شباهت بالای 50% و دارا بودن رمز شروع و پایان شناسایی و جداسازی شد سپس قطعات به ناقل pet21c منتقل و در باکتری e.coli bl21 بیان شد. با تکنیک sds-page مشخص شد که این پروتیین ها بصورت اجسام نامحلول تولید شده اند. خاصیت ضد قارچی پروتیین ها پس از تا شدن و به دست آوردن ساختار فضایی صحیح روی قارچ های alternaria alternata و fusarium graminearum آزمایش شد. نتایج این آزمون پس از تجزیه و تحلیل آماری با نرم افزار sas در سطح 5% معنی دار بود.