شناسایی پسودوموناس آئروژ‍ینوزا از نمونه های بالینی بر اساس تکثیر ژن های algd,oprl,exoa و مقایسه با روش فنوتیپیک

مقدمه:. سودوموناس آئروژینوزا یکی از رایج ترین عوامل عفونتهای بیمارستانی به حساب می آورند. در چند دهه اخیر مقاومت ذاتی واکتسابی آنتی بیوتیکی پسودوموناس آئروژینوزا کنترل عفونت با این سویه ها را مشکل کرد ه است .بیشتر آزمایشگاهها برای شناسایی پسودوموناس آئروژینوزا از روش کشت استفاده می کنند ولی روشی وقت گیر می باشد از طرفی دارای نتایج کاذب می باشد.در این تحقیق برای انجام روش pcr ما از دو نوع پرایمر اختصای بهره گرفته ایم وقصد داریم با مقایسه نتایج حاصل از pcr باستفاده از پرایمرهای منتشر شده در مقالات وپرایمرهای طراحی شده در این تحقیق به کمک آنالیز بیوانفرماتیک به نتایج دقیق تری دست یابیم .هدف از این تحقیق بررسی حساسیت pcr در تشخیص باکتری سودوموناس آئروژینوزا در نمونه های کلینیکی با استفاده از طراحی شده و پرایمر های منتشر شده در مقالات می باشد. . مواد وروش کار:در این تحقیق 150نمونه کلینیکی جمع شده وpcr با هدف سه ژن بسیار اختصاصی این باکتری به نام های ژن ,exoa oprl و algd انجام گرفت .برای جداسازی کروموزم باکتری از نمونه های بیماران از کیت invitec,germany)) استفاده شد.dna استخراج شده در دمای c 20- نگهداری شدند. با کمک روش آنالیز بیوانفورماتیکی برای نواحی بسیارثابت ژنهای فوق پرایمرهای اختصاصی طراحی شد . بااستفاده ازپرایمرهای طراحی شده وپرایمرهای منتشرشده درمقالات نمونه هااز نظر وجود پسودوموناس آئروژینوزا مورد ارزیابی به روش pcr قرار گرفت. نتایج: در این مطالعه حساسیت و اختصاصیت واکنش pcr با استفاده از پرایمرهای طراحی شده ومنتشر شده در مقالات مورد بررسی وارزیابی قرار گرفت 70 سویه سودوموناس آئروژینوزادرکشت نمونه هاجداشد .با بهره گیری از پرایمرهای ژنsrna16 تمام 70 نمونه کشت مثبت نتایج یکسانی داشتند در حالیکه با بکارگیری پرایمرهای طراحی شده نتایج مثبتpcrبه ترتیب برا ی ژنهایexoa،oprlوalgdدر 67 ، 70 و69 نمونه بدست امدکه بترتیب 96.15 , 100و98.6 ?دارای حساسیت میباشد . درصورتیکه باپرایمرهای منتشرشده نتایج مثبت به ترتیب برا ی ژنهای فوق در57، 49 و 28 نمونه بدست امدکه بترتیب5/81 ?، 70? و 40? دارای حساسیت میباشد.برای نشان دادن اختصاصیت واکنش pcr تمام 150 نمونه بیمار با کمک دو نوع پرایمر واکنش pcr با هدف سه ژن فوق انجام گرفت اختصاصیت واکنش با پرایمرهای طراحی شده 100%بود یعنی تمام نمونه های کشت منفی با روش pcr هم منفی بودند.درحالیکه با کمک پرایمرهای منتشر شده در مقالات سه نمونه بیمار که کشت منفی داشتند pcr برروی ژن alg وopr مثبت گزارش گردید در واقع اختصاصیت واکنش با پرایمرهای منتشر شده 94.2 گزارش گردیده است. نتیجه گیری: در این بررسی دو نوع پرایمر و سه ژن حفاظت شده پسودوموناس آئروژینوزا برای تشخیص به روش pcr مورد استفاده قرار گرفت و نتایج مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج این تحقیق نشان دادکه بابکارگیری پرایمرهای اختصاصی مناسب درتکنیکpcrمعمولی میتوان باحساسیت وویژگی بسیاربالاکلونیزاسیون سودوموناس آئروژینوزارادربیماران حساس مثل سیستیک فیبروزیس خیلی زودترازمثبت شد ن کشت نشان داد.