بررسی مولکولی ژن پروتئین oapa در سویه های هموفیلوس آنفلوانزا جدا شده از ایران، در راستای طراحی واکسن بومی علیه آن

پایان نامه
چکیده

چکیده: haemophilus influenzae، یک باکتری گرم منفی و پاتوژن اختصاصی انسانی است که از نظر بیماری زایی می تواند ایجاد مننژیت حاد باکتریایی، سپتی سمی، اپی گلوتیت، باکتریمی، عفونت گوش میانی و غیره کند. در درمان آن، ابتدا آنتی بیوتیک ها و سپس واکسن های کنژوگه مورد استفاده قرار گرفت. در طراحی این واکسن ها از پروتئین های حفاظت شده باکتری، به همراه کپسول پلی ساکاریدی استفاده می شود. هدف این مطالعه بررسی یکی از این پروتئین های حفاظت شده در باکتری هموفیلوس آنفلوانزای ایرانی با هدف طراحی واکسن بومی علیه آن می باشد. oapa یک پروتیین آدهزینی است که عامل ایجاد مورفولوژی کلنی شفاف در h. influenzae می باشد. وزن مولکولی آن 47kda بوده و در میان تمامی گونه های h. influenzae حفظ شده است. oapa اتصال میکروارگانیسم به سلول های اپی تلیال در کشت سلولی را تسهیل کرده و یکی از عوامل مهم در کلنی شدن میکروارگانیسم در ناحیه حلقی گلوگاه می باشد و می تواند بعنوان یک کاندیدای مهم در طراحی واکسن علیه عفونتهای h. influenzae مطرح شود. تعداد 14 سویه ی بالینی h. influenzae ها (4 سویه که مربوط به type b h. influenzae و 10 سویه مربوط به nontypeable h. influenzae)، مربوط به بخش های مختلف بدن شامل چشم، نازوفارنکس، خون، csf و bal از بیمارستان میلاد تهیه شد. پس از کشت باکتری ها بر روی شکلات آگار، به منظور تشخیص صحیح h. influenzae، تست های اکسیداز، کاتالاز و نیازمندی به فاکتورهای x و v، انجام شد. سپس جهت تعیین بیوتایپ این سویه ها، تست های ایندول، اوره آز و دکربوکسیلاسیون اسیدآمینه ی اورنیتین صورت گرفت. همچنین به منظور آنالیز مولکولی این ژن، استخراج و تخلیص dna با روش جوشاندن صورت گرفته و سوپرناتانت حاوی dna، جهت واکنش pcr مورد استفاده قرار گرفت. برای این ژن، دو جفت پرایمر اختصاصی طراحی گردید، یکی برای قسمت n-ترمینال ژن و دیگری برای قسمت c-ترمینال. و در نهایت محصولات pcr تعدادی از سویه ها که بطور تصادفی انتخاب شده بودند، جهت تعیین توالی به شرکت های مربوطه ارسال گردید. نتیجه تعیین بیوتایپ سویه ها نشان داد، 29% از سویه ها مربوط به بیوتایپ i، 29% مربوط به بیوتایپ ii، 21.4% مربوط به بیوتایپ iii، 7.14% مربوط به بیوتایپ iv، 7.14% مربوط به بیوتایپ v و 7.14% مربوط به بیوتایپ vii می باشند. نتایج واکنش pcr نیز نشان داد از بین 14 سویه بالینی مورد مطالعه، 11 نمونه دارای باند حدود 800 جفت بازی در ناحیه ی n- ترمینال (نوکلئوتیدهای شماره ی 792-1)، و 3 نمونه ی باقیمانده ها (که همگی مربوط به non typeable h. influenzae)، دارای باند حدود 700 جفت بازی در این ناحیه هستند. و هر 14 سویه در ناحیه ی c-ترمینالشان (نوکلئوتیدهای شماره ی 1295-792) دارای باند حدود 600 جفت باز بودند. یازده سویه ای که در ناحیه ی n-ترمینال خود دارای باند در محدوده ی حدود 800 جفت باز بودند، بسیار شبیه به توالی های نوکلئوتیدی موجود در ncbi بودند، بطوریکه بین 99-95% شباهت مشاهده گردید. برای 3 نمونه ای که از بقیه متفاوت ظاهر شدند و در ناحیه n-ترمینال از ژن دارای باند در محدوده ی حدود 700 بودند، بررسی این توالی در ncbi نشان داد که در هر سه نمونه، یک ناحیه ی حدود 125 نوکلئوتیدی که مابین نوکلئوتیدهای شماره 605 و شماره 731 بوده اند، دچار حذف شده است و لذا وجود باندی با حدود 100 جفت باز کوتاهتر از حد مورد نظر در بررسی pcr ناحیه n-ترمینال، می تواند علت آن باشد. و در کل این ژن در این سویه ها دارای 96-94% تشابه با توالی های ncbi بود. همچنین نتیجه بلاست نواحی c- ترمینال سویه های هموفیلوس آنفلوانزای مورد استفاده در این مطالعه، شباهت 99-95 % را با داده های ncbi نشان داد. لذا پیشنهاد می شود که در تحقیقات آینده، که به منظور طراحی واکسن صورت می گیرد، به دلیل حفاظت شده بودن این ژن در میان تمامی سویه های هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b، استفاده از آن مورد توجه قرار گیرد. کلمات کلیدی: haemophilus influenzae، oapa، pcr

۱۵ صفحه ی اول

برای دانلود 15 صفحه اول باید عضویت طلایی داشته باشید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

بررسی مولکولی ژن oapA در سویه‌های هموفیلوس آنفلوانزای ایزوله‌شده از ایران، به‌عنوان کاندید در طراحی واکسن بومی ‌علیه این باکتری

زمینه و هدف: باکتری هموفیلوس آنفلوانزا می‌تواند به‌عنوان پاتوژن بخش تنفسی انسان عمل کند. عفونت‌ ناشی از این باکتری به‌طور سنتی به‌وسیله آنتی‌بیوتیک‌ها‌ درمان می‌شود. استفاده از واکسن‌های کونژوگه در مهار بیماری‌های ناشی از این باکتری نیز بسیار موفقیت‌آمیز بوده است. در طراحی این واکسن‌ها از کپسول پلی‌ساکاریدی هموفیلوس آنفلوانزا و پروتئین‌های ایمونوژن استفاده می‌شود. این مطالعه با هدف بررسی مولکول...

متن کامل

بررسی مولکولی ژن oapa در سویه های هموفیلوس آنفلوانزای ایزوله شده از ایران، به عنوان کاندید در طراحی واکسن بومی علیه این باکتری

زمینه و هدف: باکتری هموفیلوس آنفلوانزا می تواند به عنوان پاتوژن بخش تنفسی انسان عمل کند. عفونت ناشی از این باکتری به طور سنتی به وسیله آنتی بیوتیک ها درمان می شود. استفاده از واکسن های کونژوگه در مهار بیماری های ناشی از این باکتری نیز بسیار موفقیت آمیز بوده است. در طراحی این واکسن ها از کپسول پلی ساکاریدی هموفیلوس آنفلوانزا و پروتئین های ایمونوژن استفاده می شود. این مطالعه با هدف بررسی مولکولی ...

متن کامل

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...

متن کامل

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...

متن کامل

بررسی تغییر ژن پروتئین M2 ویروس آنفلوانزا H1N1 در بیان آن درباکتری Ecoli سویه BL21

Aim and Background: By Attention to gene sequence and each amino acid codon in host which express protein, also in order to probable vaccine production against influenza A, a major cause of mortality in a year,this research was carried out. M2 protein is conserved and it can be a proper candidate vaccine for influenza infection. Materials and Methods: Present research was an experimental study....

متن کامل

همسانی ژنتیکی سویه های واکسن مایکوپلاسما آگالاکتیه جدا شده از طالقان، لرستان و شیراز در ایران

سابقه و هدف: ایران یکی از اصلی ترین کانون های فعالیت مایکوپلاسما آگالاکتیه در دام های نشخوارکننده در جهان شناخته است. سه سویه بومی طالقان، لرستان و شیراز برای تولید تنها نمونه واکسن کشته علیه آگالاکسی در ایران مورد استفاده قرار می گیرند. این مطالعه با هدف آگاهی از ارتباط ژنتیکی میان این سویه ها انجام شد. مواد و روش ها: از هر سه سوی...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023