مطالعه اثر سرما بر تکوین جنین وزغ سبز (anura)، همرا با تلاش جهت حفظ انجمادی تخم های آنها

دوزیستان موجوداتی خونسرد هستند که تقریبأ همه ی جنبه های فیزیولوژی و رفتاری آنها تحت تأثیر دما می باشد. هدف از این مطالعه، بررسی اثر سرما بر روند تکوین جنین یکی از گونه های دوزیست به نام(pseudepidalea viridis) bufo viridis (وزغ سبز) و تلاش جهت انجماد تخم آنها می باشد. جهت بررسی اثر سرما، تخم های وزغ در آکواریومی قرار داده شدند که توسط دو منبع سرما و گرما دامنه ای از درجه حرارت ها را ایجاد می کرد. تخم ها در معرض طیف متفاوتی از دما ها قرار گرفتند. پس از آن اندازه ی جنین و تکوین مراحل جنینی نسبت به سن، در پنج دما (c°8، c°15، c°18، c°25 و c°30) با یکدیگر مقایسه شد. نتایج مطالعات نشان داد که با کاهش دما سرعت تکوین کاهش می یابد و همچنین جنین های رشد یافته در دماهای 8، 15، 18 و 25 در مرحله ی تکوینی 22 جدول gosner از لحاظ اندازه بزرگتر از جنین های رشد یافته در دمای 30 درجه بودند درحالی که در مرحله ی تکوینی 25 جدول gosner تنها اندازه ی جنین ها در دمای 8 در مقایسه با 30 درجه تفاوت معنا داری را نشان می داد. جهت ذخیره سازی انجمادی جنین ها از روش انجماد شیشه ای یا ویتریفیکاسیون استفاده شد و بدین منظور ویژگی های سمیت سه نگهدارنده ی انجمادی (متانول، پروپیلن گلیکول و دی متیل سولفوکسید(dmso) قبل از انجام ویتریفیکاسیون مورد بررسی قرار گرفت و بر اساس این ویژگی ها، محلول های ویتریفیکاسیون ساخته شد. نتایج حاصله نشان داد که متانول کم ترین و dmso بالا ترین میزان سمیت را دارا می باشد. جهت ویتریفیکاسیون جنینهای دارای ژله و بدون ژله در مرحله ی بلاستولا و جنین های مرحله ی 17 در معرض چهار محلول مختلف انجمادی تحت دو دوره زمانی مختلف (3 و 5 دقیقه) قرار گرفتند که تنها بلاستولای ژله داری که به مدت 3 دقیقه در محلول انجمادی متشکل از 2 مولار dmso، 3 مولار پروپیلن گلیکول و 15/0 مولار پلی اتیلن گلیکول قرار داشتند پس از ذوب، توانستند تا مرحله ی تشکیل لوله ی عصبی تکوین یابند.