ردیابی، تکثیر و همسانه سازی ژن توماتیناز از قارچ fusarium oxysporum f.sp. melonis
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه صنعتی اصفهان - دانشکده کشاورزی
- نویسنده فاطمه زرندی
- استاد راهنما فرهاد شکوهی فر بهرام شریف نبی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1391
چکیده
قارچ ها جهت غلبه بر سیستم دفاعی گیاه از ابزار مختلفی بهره می گیرند. ترکیبات فیتوآنتی سیپین از جمله مواد دفاعی است که در گیاه جهت جلوگیری از حمله پاتوژن ها تولید می شود. آنزیم توماتیناز، که یک آنزیم گلیکوزیل هیدرولازی است، جهت تجزیه فیتوآنتی سیپین و غلبه بر سیستم دفاعی گیاه توسط طیفی از قارچ ها از جمله تعدادی از فرم های اختصاصی قارچ fusarium oxysporum تولید می شود. با توجه به جایگاه خربزه در کشاورزی استان خراسان و اهمیت بیماری زردی و پژمردگی آوندی خربزه در این مطالعه حضور ژن توماتیناز در جدایه های مربوط به نژاد 1و 1.2 قارچ f. oxysporum f. sp. melonis با هدف تکثیر، همسانه سازی توالی ژنومی و ساخت سازه بیانی آن انجام شد. بدین منظور آغازگرهای اختصاصی psh30-f/r بر اساس توالی ژن توماتیناز در فرم اختصاصی f. oxysporum f. sp. lycopersici طراحی شد. نتایج الگوی الکتروفورزی محصول واکنش زنجیره ای پلی مراز جدایه ها، اختصاصی بودن آغازگرهای طراحی شده و وجود ژن توماتیناز در قارچ fom را تأیید نمود. قطعه تکثیر یافته جهت مطالعات تکمیلی در ناقل ptg19-t همسانه سازی گردید. نتایج توالی یابی دو جهته سازه ساخته شده، وجود چندین جهش را در توالی توماتیناز fom نشان داد. به منظور ساخت سازه بیانی توماتیناز fom ، آغازگرهای اختصاصی توماتیناز با نام psh30.3-f/r براساس جایگاه برشی spe1 و sac1 طراحی شد. انجام واکنش زنجیره ای پلی مراز با استفاده از این آغازگرها قطعه ای با تعداد 1056 جفت باز را تکثیر کرد که این قطعه جایگاه های برشی مورد نظر را دارد. به منظور بیان پروتئین، قطعه توماتیناز تکثیر یافته به ناقل pet21 متصل شده و به سویه bl21 انتقال یافت . سازه ساخته شده با نام petfom به صورت دو جهته توالی یابی گردید. نتایج توالی یابی نشان داد که سازه ساخته شده در جهت صحیح قرار گرفته و فاقد کدون پایان است. بعد از تأیید سازه، بیان توماتیناز در سطح پروتئینی بررسی گردید. نتایج به دست آمده نشان داد که بیان پروتئینی توماتیناز نیازمند تغییر عوامل دیگری از قبیل تغییر سویه باکتری میزبان، اعمال تغییرات دمایی پایین تر و یا غلظت های دیگری از iptg است. به منظور بررسی بیان توماتیناز در سطح رونویسی واکنش rt-pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی توماتیناز انجام شد و نتایج آن نشان داد که توماتیناز در سطح رونویسی بیان شده است.
منابع مشابه
ردیابی و تکثیر ژن های اثرگذار حامل دومین LysMدر ژنوم قارچ F. oxysporum f. sp. lycopersici
During the infection- while the xylem is colonized by the F. oxysporum f. sp. Lycopersici (Fol)- several effector proteins have been secreted into the xylem that suppress the plant’s defense response and enable parasitic colonization. So far, 14 effector proteins have been reported in Fol. However, there are no identified domains in their sequences. LysM effector proteins were identified ...
متن کاملردیابی و تکثیر ژن های اثرگذار حامل دومین lysmدر ژنوم قارچ f. oxysporum f. sp. lycopersici
قارچ (fol) fusarium oxysporum f. sp. lycopersici در طی کلونیزهکردن آوند گیاه گوجه فرنگی پروتئین های کوچک اثرگذاری را به درون آوند گیاه ترشح می کند که دستگاه مقاومتی گیاه را مهار یا مختل می کند و سبب بروز بیماری می شود. تاکنون 14 پروتئین اثرگذار در این بیمارگر شناسایی شده است که هیچیک دومین مشخصی در توالی پروتئینی خود ندارند. در دیگر قارچ های بیمارگر پروتئین های اثرگذار حامل دومین lys...
متن کاملActivity of Haliscosamine against Fusarium oxysporum f.sp. melonis: in vitro and in vivo analysis
Marine sponges are a potential source of new molecules with diverse biological activities. We have previously isolated a sphingosine derivative, (9Z)-2-amino-docos-9-ene-1,3,13,14-tetraol (Haliscosamine) from the Moroccan sea sponge Haliclona viscosa. The aim of this study was to test Haliscosamine in vitro and in vivo for its antifungal activity against Fusarium oxysporum f.sp. melonis causing...
متن کاملRecovery of Mutants Impaired in Pathogenicity After Transposition of Impala in Fusarium oxysporum f. sp. melonis.
ABSTRACT The ability of transposon impala to inactivate genes involved in pathogenicity was tested in Fusarium oxysporum f. sp. melonis. Somatic excision of an impala copy inserted in the nitrate reductase-encoding niaD gene was positively selected through a phenotypic assay based on the restoration of nitrate reductase activity. Independent excision events were analyzed molecularly and shown t...
متن کاملبررسی تنوع ژنتیکی جدایه های Fusarium oxysporum f.sp. melonis عامل پژمردگی طالبی و خربزه در ایران
چکیده بیماری پژمردگی فوزاریومی ناشی از قارچ Fuarium oxysporum f.sp. melonis متداولترین و گستردهترین بیماری در طالبی و خربزه در ایران و چند کشور جهان محسوب می شود. هدف از این تحقیق بررسی تنوع ژنتیکی بیمارگر در ایران بود. در این تحقیق از ٥٠ جدایه قارچ که از مناطق عمدهی خربزه کاری ایران جمع آوری شده بودند، استفاده شد، پس از خالصسازی، شناسایی و آزمون بیماریزایی، بررسی تنوع ژنتیکی انجام شد.برر...
متن کاملهمسانه سازی، شناسایی و جداسازی یک ژن گلوکز اکسیداز (GOX) از قارچ Penicillium funiculosum
گلوکز اکسیداز (β-D-گلوکز:اکسیژن 1-اکسیدوردوکتاز) با استفاده از اکسیژن مولکولی به عنوان پذیرنده الکترون، اکسیداسیون β-D-گلوکز را به گلوکونیک اسید کاتالیز نموده و منجر به تولید پراکسید هیدروژن می¬شود. این آنزیم در دامنه وسیعی از قارچ¬های مختلف، عمدتاً جنس¬های Aspergillus و Penicillium تولید شده و کاربردهای وسیعی در صنایع مختلف از قبیل شیمی، داروسازی، صنایع غذایی، بیوتکنولوژی و غیره دارد. در این مط...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه صنعتی اصفهان - دانشکده کشاورزی
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023