ارزیابی میزان تمایل یون های فلزی تثبیت شده در یک بستره بی اثر جهت غنی سازی فسفوپروتئین ها

تخمین زده می شود که حدود یک سوم همه پروتئین ها در یوکاریوت ها فسفریله هستند. فسفریلاسیون- دفسفریلاسیون، یکی از مکانیسم های اصلی فرآیند سیگنالینگ است که باعث تنظیم ویژگی های عملکردی پروتئین های درگیر در مسیرهای مختلف مرتبط با زندگی سلول می گردد. عملکردهای بسیار دقیق در موجودات زنده توسط فعالیت مسیرهای انتقال سیگنال صورت می گیرد که مسول دریافت سیگنال، تقویت و هدایت آن و ایجاد پاسخ های سلولی مناسب می باشند. از طرفی، فسفریلاسیون اشتباه هم یکی از مکانیسم های اصلی ایجاد سرطان است و یا اینکه می تواند نشانه ای برای بیماری های متابولیکی باشد. بنابراین، پروتئین های فسفریله، عوامل و اهداف مهمی در مسئله اکتشاف دارو جهت استفاده های درمانی می باشند؛ اما خالص سازی مقادیر کم آن ها به دلیل بالا بودن درجه خطاهای آزمایشگاهی، سخت و پرهزینه است. در حقیقت می توان از جنبه های بسیار متفاوتی به خالص سازی فسفوپروتئین ها نگاه کرد، که جداسازی در مقیاس بزرگ تر و یا برای اهداف آنالیتیکی، خالص سازی برای مطالعات پروتئومیکس و یا استخراج محتوای پروتئینی از عصاره ی سلولی تنها مثال هایی از این موارد هستند. به طور کلی بر اساس میزان کاربرد در آزمایشگاه های زیستی و تعداد ارجاعات مقالات، روش استفاده از بستره تمایلی یون-فلزی تثبیت شده از رایج ترین روش ها برای خالص سازی فسفوپروتئین ها می باشد. استفاده از بستره تمایلی یون-فلزی تثبیت شده جهت خالص سازی فسفوپروتئین ها از طریق سه روش رایج الکتروفورز، کروماتوگرافی و نیز ریزذرات مغناطیسی قابل انجام است. هرکدام از این روش ها به نوبه خود دارای فواید ویژه ای بوده و از معایب خاصی رنج می برند. با توجه به این امر، در این پروژه، هر سه روش الکتروفورز تمایلی یون-فلزی تثبیت شده (imaep)، کروماتوگرافی تمایلی یون-فلزی تثبیت شده (imac)، ریز ذرات مغناطیسی تمایلی یون-فلزی تثبیت شده (imanmb) را به کار بردیم تا بتوانیم مقایسه ای به منظور خالص سازی بهتر فسفوپروتئین های مغز نمونه های کوچکی مانند ماهی زبرادر جهت تعیین الگوی فسفوپروتئین ها انجام دهیم. در این پروژه، علاوه بر خالص سازی فسفوپروتئین های مغز ماهی زبرا، تغییرات الگوی این فسفوپروتئین ها به طور مستقیم، قبل و بعد از تیمار نمونه با مواد اعتیاد آور نظیر اتانل و نیکوتین نیز مورد بررسی و مشاهده قرار گرفت.