جداسازی،شناسایی و خالص سازی آنزیمهای پروتئاز از ماهیان

پروتئازهای موجود در ماهی ها و سایر آبزیان ممکن است بر اساس معیارهای متفاوتی طبقه بندی شوند اما روش استاندارد پیشنهادی توسط کمیسیون آنزیم مجمع بین المللی بیوشیمیست ها بر اساس شیوه کاتالیز بنیان نهاده شده است که بر آن اساس پروتئینازهای جانداران دریایی به چهار طبقه پروتئینازهای اسیدی، سرین، تیول و متالو پروتئینازها تقسیم بندی شده است. بر اساس نوع گونه و بسیاری ازعوامل داخلی و محیطی تاثیرگذار بر روی فیزیولوژی جانور، غلظت برخی از آنزیمها در برخی از آنها بالاتر از دیگر گونه های آبزی بوده و حتی در برخی گونه ها ممکن است آنزیمهای منحصر به فردی دیده شوند. برای استخراج یک نوع آنزیم معین شناخت محل تجمع و ویژگیهای بیوشیمیایی آن بسیار ضروری است. برای استخراج و خالص سازی آنزیم نیز بسته به نوع آنزیم مورد نظر از روشهایی استفاده میشود که ممکن است از نظر روش کار و مواد مورد استفاده تفاوتهایی داشته باشند ولی همگی دارای اساس یکسانی هستند و شامل آماده سازی، هموژن کردن نمونه در یک بافر مناسب، سانتریفیوژ برای حذف مواد زائد، تغلیظ و تخلیص و شناسایی میباشند. در تمامی مراحل استخراج و خالص سازی آنزیم برای حفظ فعالیت آنزیم و جلوگیری از، از دست رفتن فعالیت ناشی از دناتوره شدن آن بایستی کل فرآیند در دمای بین صفر تا 4 درجه سانتیگراد انجام شود. برای شناسایی و تعیین وزن مولکولی آنزیمهای استخراجی معمولا از روش sds-page استفاده میشود.