تخلیص پروتئین ltp از باکتری e. coli ترانسفورم شده و بررسی خصوصیات مولکولی و بیوشیمیایی آن

کشف پروتئین های انتقال دهنده لیپیدها (ltp) به حدود 30 سال پیش بر می گردد. این پروتئین ها انتقال لیپیدها را از یک غشای دهنده به یک غشای گیرنده تسهیل می کنند و به دو زیرگروه ltp1 و ltp2 تقسیم می شوند. پروتئین مذکور به دلیل عملکرد غیر اختصاصی،ns-ltp نیز نامیده می شود. این پروتئین فعالیت ضدقارچی و ضدباکتریایی دارد. از این پروتئین می توان در ساخت حسگرهای زیستی و تکنولوژی انتقال دارو استفاده کرد. هدف مطالعه حاضر، بهینه سازی شرایط لازم جهت تولید پروتئین نوترکیب ltp در یک سویه مناسب و مستعد شده از کلی باسیل است. پروتئین نوترکیب ltpدر مراحل بعد خالص شده و بر روی آن مطالعات پروتئومیکسی به منظور شناسایی ویژگی های آن صورت خواهد گرفت. در این بررسی وکتور بیانی (pgex-6p-2) که در آن ژن ltp در مجاورت ژن gst (گلوتاتیون-s- ترانسفراز) قرار داده شده است به کارگرفته شد. وکتور نوترکیب به درون سویه مناسب e. coli ترانسفورم شدند. سلول های باکتریایی پروتئین نوترکیب متصل به gst را در محیط کشت lb بیان کردند. سلول های لیز شده به وسیله سونیکاسیون، سانتریفوژ شده و سوپرناتانت حاصله جمع آوری و در سوسپانسیون گلوتاتیون آگارز انکوبه شدند. ذرات گلوتاتیون آگارز با بافر شسته و نتیجه، با الکتروفورز sds-page بررسی گردید. رنگ آمیزی با رنگ کوماسی برلیانت (cbb) به منظور تشخیص و شناسایی باندهای پروتئینی ژل ها صورت گرفت