پایداری ترمودینامیکی و خواص پیوندی بتالاکتوگلوبولین (blg)

با توجه به اهمیت blg بعنوان یکی از اصلی ترین پروتئینهای شیر و نقش و عملکرد ویژه آن در حمل لیگاندهای آبگریز، بخصوص رتینول، در این پژوهش با استفاده از روشهای مختلفی مانند طیف سنجی فلورسانس و uv-vis، روش کمومتریtwo-way، اتصال مولکولی و شبیه سازی دینامیک مولکولی، پایداری ترمودینامیکی و تغییرات ساختاری و خواص پیوندی blg در اثر برهمکنش با سورفکتانتهای یونی cpc، cntabs و sdbs و همچنین لیگاندهای رتینول، رزوراترول، bdmc و dabc مورد مطالعه قرار گرفت. نتایج حاصل از طیف سنجی جذبی و فلورسانس حاکی از غیر طبیعی شدن متعاون ساختار blg در حضور تمامی سورفکتانتهای مورد مطالعه است. تمامی نمودارهای غیر طبیعی شدن، با در نظر گرفتن وابستگی خطی مقدار ?gd به غلظت سورفکتانت در مناطق قبل و بعد از انتقال مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. مقادیر ?gd(h2o) در مطالعه برهمکنش cpc و blg نشان داد که پروتئین در ?c55 دارای کمترین پایداری میباشد. با توجه به موقعیت نمودارهای غیر طبیعی شدن در حضور سورفکتانتهای cntabs، میتوان چنین نتیجه گیری کرد که قدرت غیر طبیعی کنندگی این سورفکتانتها با افزایش طول زنجیر هیدروکربنی افزایش مییابد. این امر نشان دهنده نقش تاثیر گذار برهمکنشهای آبگریز در اتصال این سورفکتانتها به blg است. از طرفی مطالعه اتصال رتینول به blg در حضور این سورفکتانتها نشان میدهد که میزان تمایل blg به اتصال رتینول در حضور تمامی غلظتهای هر سه سورفکتانت افزایش یافته است. مطالعه غیر طبیعی شدن blg در حضور سورفکتانت آنیونی sdbs نشان داد که قدرت غیر طبیعی کنندگی سورفکتانت sdbs در محیط اسیدی بیشتر از محیطهای خنثی و قلیایی است. این موضوع به دلیل حضور بارهای مثبت بر روی پروتئین در محیط اسیدی است. آزمایشات تیتراسیون فلوریمتری رتینول توسط blg در حضور sdbs نیز نشان داد که میزان تمایل blg به اتصال رتینول در حضور تمامی غلظتهای سورفکتانت و بخصوص در غلظتهای متناظر با نواحی پیش از انتقال در نمودارهای غیر طبیعی شدن این سورفکتانت و در هر سه ph افزایش یافته است.در ادامه این مطالعات، اتصال رتینول به blg به عنوان شاخص عملکرد پروتئین، در حضور cpc مورد مطالعه قرار گرفت. از طرفی سعی برآن شده است که غلظت مورد استفاده در محاسبه ثابت اتصال رتینول به blg، با استفاده از روش کمومتری two-way اصلاح و ثابت اتصال دقیقتری گزارش گردد. این مطالعات نشان داد که میزان تمایل blg به اتصال رتینول در حضور تمامی غلظتهای این سورفکتانت کاهش یافته است.از آنجا که مطالعات دینامیک مولکولی اطلاعاتی راجع به تغییرات ساختار پروتئین در اثر اتصال لیگاندها و همچنین پایداری کمپلکس تشکیل شده در محلول آبی در اختیار ما قرار خواهد داد در بخش پایانی این پژوهش برهمکنش blg با رزوراترول، bdmc و dabc با استفاده از مطالعات اتصال مولکولی و شبیه سازی دینامیک مولکولی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج مطالعات اتصال مولکولی نشان داد که رزوراترول با برقراری دو پیوند هیدروژنی، bdmc با چهار پیوند هیدروژنی و dabc با پنج پیوند هیدروژنی در جایگاه اتصال سطحی blg قرار میگیرند. مطالعات شبیه سازی دینامیک مولکولی این کمپلکسها نیز نشان داد که ساختار blg تنها در حضور لیگاند bdmc تغییر می یابد.