ساخت dna واکسن fmdv-type o-vp1 gene ، رادیوواکسن ویروس تب برفکی و ارزیابی پاسخ ایمنی در موشهای balb/c با استراتژی پرایم بوست

هدف اصلی واکسن‏های دامی بهبود و کنترل محصولات دامی و کاهش مصرف دارو و هورمون ها می باشد. ویروس بیماری تب برفکی باعث زیان های اقتصادی زیادی در دام ها می شود. مطالعات ایمونولوژیکی در ویروس تب برفکی نشان داده است که اپی توپ غالب مسئول القائ پاسخ آنتی بادی خنثی کننده، باقیمانده های آمینو اسیدی موجود در لوپ g-h هستند که لوپ سطحی پروتئین ساختمانی vp1 می باشد. واکسن رایج این بیماری به دلایلی چون نیمه عمر کوتاه، نیاز به زنجیره سرد و عدم ایجاد پایداری دایم و ... به تنهائی نمی‏تواند در کنترل آن موثر باشد، لذا هدف از این تحقیق ساخت واکسن dna حاوی ژن vp1 ویروس تب برفکی تایپ o جداسازی شده از ایران در سال 1386، ساخت رادیوواکسن این بیماری با استفاده از پرتو گاما و در نهایت ارزیابی پاسخ های ایمنی همورال و سلولی این دو نوع واکسن در مدل موشی می باشد. در این تحقیق ژن vp1 ویروس تب برفکی تایپ o جداسازی شده از شهر ری در سال 1386 با استفاده از یک جفت پرایمر اختصاصی و آزمون rt-pcr جداسازی و جهت ساخت dna واکسن، در ناقل بیانی pcdna3.1+ الحاق گردید. سپس ویروس فوق تکثیر، توسط پرتوگاما غیرفعال سازی شده و جهت ساخت رادیوواکسن فرمولاسیون گردید. جهت بررسی پاسخ های ایمنی همورال و سلولی، واکسن dna و رادیوواکسن به موش های balb/c تزریق شدند. بررسی تیتر آنتی سرم خنثی کننده نشان داد که گروه‏های واکسینه شده با واکسن‏های dna vaccine gmcsf, radio vaccine, normal vaccine, pb 1, pb2 and pb3 دارای تیتر آنتی سرم بیش از 2/1 می باشند و در گروه‏های واکسن نرمال و رادیوواکسن بیشترین تیتر آنتی سرم مشاهده شد. همچنین بررسی ایمنی سلولی با استفاده از آزمون mtt و مقادیر اینترفرون گاما نشان داد که القا ایمنی سلولی در گروه های پرایم بوست 1، 2 و 3 نسبت به گروه‏های رادیوواکسن، واکسن نرمال، dna vaccine و dna vaccine + gmcsf بیشتر بود، همچنین در گروه‏های پرایم بوست 1 و 2 نسبت به پرایم بوست 3 بیشتر بوده است. به نظر می رسد که تعداد لنفوسیتهای th1 در گروههای پرایم بوست 1 و 2 افزایش معنی‏داری داشته است. اندازه گیری میزان اینترلوکین 10 و 4 در سه گروه پرایم بوست نشان داد که در این سه حالت تعداد لنفوسیتهای th2 تغییر معنی‏داری نسبت به گروه‏های کنترل منفی نداشت. در نهایت نتیجه‎گیری شد که استراتژی پرایم بوست هترولوگ با استفاده از dna vaccine + gmcsf و واکسن غیرفعال باعث فعال‏سازی پاسخ‏های ایمنی همورال وسلولی کاملاً مناسب در مدل‏های موشی شده است. البته واکسن نرمال و رادیوواکسن باوجودی که پاسخ ایمنی هومورال خوبی داشتند ولی القای لنفوسیتهای th1 در آنها کمتر بوده است. لذا می توان گفت برای القا پاسخ ایمنی هومورال وابسته به t cell گروههای واکسن موثر به ترتیب: 1. گروههای pb2 و pb1 2. گروههای نرمال واکسن و رادیوواکسن 3. گروه pb3 4. گروه dna vaccine- gmcsf