تهیه ایمونوتوکسین با استفاده از سایتوکین g-csf و سم گیاهی

ایمونوتوکسین ها عوامل فارماکولوژیکی با سموم پروتئینی متصل به یک لیگاند هدف مناسب هستند و به دو صورت شیمیایی و نوترکیب ساخته می شوند. در تحقیق حاضر زنجیره a از سم پروتئینی و گیاهی ریسین که ریبوزوم های یوکاریوتی را غیرفعال می کند توسط دو کراس لینکر مناسب برای تهیه ایمونوتوکسین ها یعنی spdp و smpt به سایتوکین g-csf متصل شده است تا یک ایمونوتوکسین به عنوان دارویی برضد سرطان خون تولید شود. بدین منظور زنجیره a ریسین به صورت نوترکیب در میزبان اشرشیاکلی سویه bl21(de3) بیان شده و توسط کروماتوگرافی تمایلی تخلیص شده است. سایتوکین موردنظر که بصورت تجاری تهیه گردیده، در معرض کراس لینکر 2-it قرار گرفته تا دارای گروه های سولفیدریل اضافی شود و بازده کانژوگاسیون از این طریق افزایش یابد. تمام مراحل کانژوگاسیون در بافر pbs-edta در ph حدود 5/7 انجام شد. نتایج بر روی ژل sds-page مشاهده و با رنگ آمیزی نیترات نقره تشکیل کانژوگه مورد نظر تایید شد. سپس برای تخلیص ایمونوتوکسین ساخته شده از روش خارج کردن باند پروتئینی از ژل و رنگ آمیزی منفی ایمیدازول ـ روی استفاده شد. با توجه به نتایج به دست آمده به نظر می رسد، پیوند دی سولفیدی برگشت پذیر ایجاد شده توسط کراس لینکر smpt دارای پایداری بیشتری نسبت به پیوند دی سولفیدی ایجاد شده توسط کراس لینکر spdp است.