تاثیر نوع ریز نمونه و تنظیم کننده های رشدی بر کالزایی و تولید آنتوسیانین در سیب (malus spp. makamik)

سیب ماکامیک ژرم پلاسمی از سیب است که خاستگاهش آسیای مرکزی و سیبری است، مقاوم به سرما بوده و توانایی بالایی در تولید آنتوسیانین دارد. جهت بررسی توانایی تولید آنتوسیانین در سیستم کشت درون شیشه ای نیاز به تولید کالوس و کشت سوسپانسیون سلولی بود. به منظور بررسی تولید کالوس و آنتوسیانین از محیط پایه ms، همراه سه نوع اکسین در ترکیب با دو نوع سایتوکینین، با چهار نوع ریزنمونه استفاده شد. مشخص شد naa و دمبرگ از کالزایی بهتری برخوردار بودند و kin نسبت به bapآنتوسیانین بیشتری تولید کرد. جهت افزایش رشد کالوس نمونه ها به دو محیط کشت ms و b5 انتقال یافتند در هر دو محیط رشد کالوس ها به خوبی انجام شد و msبهتر بود . بدلیل کالزایی پایین آزمایش دوم انجام شد و محیط کشت حاوی 5/0 میلی گرم در لیترkin، یک میلی گرم در لیتر2,4-d و یک میلی گرم در لیتر naa (m4 ) بهترین تیمار شناخته شد. نمونه ها به محیط کشت القاء که شامل محیط پایه m9 و m4 همراه دو غلظت فنیل آلانین بود انتقال یافته و در نور قرار گرفتند. محیط m9نسبت به محیطm4 از تولید آنتوسیانین بیشتری برخوردار بود. برای بهینه سازی m4 آزمایش سوم ازچهار نوع ریزنمونه انجام شد. ترکیب هورمونی حاوی 5/0 میلی گرم در لیتر kin و دو میلی گرم در لیتر naa بیشترین تاثیر را در کالزایی داشت هرچند تاثیر معنی داری با ترکیبm4 نداشت. آزمایش دیگری با ریزنمونه های حاصل از گیاهان درون شیشه ای انجام شد. دو نوع ریزنمونه در دو محیط m4 و s (ms شامل 5/0 میلی گرم kin و یک میلی گرم naa) انجام گرفت.محیط کشت s از القاء کالوس خوبی برخوردار بود، ولی پس از القاء کالوس، رشد کالهای تولیدی به مراتب کمتر از محیط کشتm4 بود. کالهای تولیدی در این آزمایش نیز در محیط m9 نسبت بهm4 درصد سطح کالوس دارای آنتوسیانین بیشتری تولید کردند. در آزمایش دیگرریزنمونه ها در محیط m4 کشت گردیدند. قطعات برگی قطر و وزن کالوس بیشتری داشتند. کشت سوسپانسیون سلولی جهت بررسی های میکروسکوپی انجام گرفت و از چهار نوع محیط کشت القاء استفاده شد. محیطm9 باعث تولید آنتوسیانین بیشتر همچنین مرگ سلولی کمترشد. دو غلظت فنیل آلانین در مرگ سلولی تاثیر یکسانی داشتند اما غلظت 5/0 میلی گرم در لیتر موجب تولید آنتوسیانین بیشتری شد. همچنین هر قدر میزان سلول های تولید کننده آنتوسیانین بیشتر شد مرگ سلولی نیز کاهش یافت.