شناسایی و خالص سازی نسبی آنزیم tomatinase در جدایه های قارچ fusarium oxysporum f.sp. lycopersici عامل پژمردگی آوندی گوجه فرنگی و بررسی نقش آن در بیماریزایی جدایه های مختلف این قارچ

چکیده گیاه گوجه فرنگی همانند سایر گیاهان دارای مکانیسمهای متعددی در برابر حمله پاتوژنها می باشد که یکی از این مکانیسم ها تولید ترکیبات phytoanticipine می باشد از جمله ? - tomatine که بطور طبیعی در گیاه گوجه فرنگی و در تمام قسمتهای آن وجود داشته و خاصیت antimicrobial دارد. یکی از مهمترین بیماریهای گوجه فرنگی بیماری پژمردگی آوندی با عامل fusarium oxysporum f.sp. lycopersici می باشد که این پاتوژن در مرحله کلونیزه کردن ریشه گیاه تولید آنزیمی بنام tomatinase می کند که توانایی در هم شکستن ساختار ? –tomatine و غیر سمی کردن آن را دارد. این تحقیق با هدف شناسایی فعالیت آنزیم tomatinase از نظر کیفی و مقایسه فعالیت آنزیم از نظر کمی در جدایه های نژاد فیریولوژیک 1 قارچ fusarium oxysporum f.sp. lycopersici عامل پژمردگی آوندی گوجه فرنگی در استانهای خراسان شمالی و رضوی با تکنیک کروماتوگرافی لایه نازک و اسپکتروفتومتر انجام شد. بدین منظور در طی فصل زراعی 89-88 از مناطق عمده گوجه کاری استانهای فوق نمونه برداری صورت گرفت، و 20 جدایه قارچ fol از بافت آوندی ریشه، طوقه و ساقه گیاهان گوجه فرنگی آلوده جداسازی گردید. آزمون اثبات بیماریزایی روی گوجه فرنگی رقم bonny best (حساس عمومی) انجام شد و 15 جدایه بیماریزا که عامل پژمردگی آوندی بودند تشخیص داده شد و پس از آزمون تعیین نژاد فیزیولوژیک به منظور بررسی فعالیت آنزیم tomatinase، ابتدا سوسپانسیونی از میکروکنیدی جدایه های مربوط به گروههای بیماریزایی مختلف قارچ تهیه و پس از آن عصاره گیری پروتئین های قارچ انجام شد و بعد از خالص سازی نسبی توسط تیوبهای دیالیز و فریز درای با استفاده از تکنیک کروماتوگرافی لایه نازک و به کمک ترکیبات استاندارد tomatidine و ? -tomatine فعایت آنزیم tomatinase مشاهده گردید. برای مقایسه فعالیت آنزیم در گروههای مختلف بیماریزایی قارچ نیز اسپکتروفتومتر با معرف دی نیترو سالیسیلیک و در طول موج 520 نانومتر انجام و تفاوت میزان جذب در گروههای مختلف بیماریزایی مشاهده گردید. کلید واژه ها: fusarium oxysporum، tomatinase، کروماتوگرافی، گوجه فرنگی