بررسی نقش پروپپتید انتهای کربوکسیل در ترشح bka (bacillus sp. kr8104 ?-amylase)
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس - دانشکده علوم پایه
- نویسنده فاطمه یوسفی
- استاد راهنما خسرو خواجه ابولفضل گلستانی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1389
چکیده
سویه bacillus sp. kr8104 آلفا-آمیلازی غیر وابسته به کلسیم تحت نام bka تولید و با کارایی بالا به محیط کشت خود ترشح میکند. کریستالوگرافی آنزیم خالصشده از محیط کشت پروتئینی با سه دمین عمومی آلفا-آمیلازها متشکل از 422 آمینو اسید را نشان میدهد. ژن این آنزیم پروتئینی با 659 آمینو اسید کد میکند که علاوه بر ناحیه 422 آمینو اسیدی به دست آمده در کریستالوگرافی دارای دو پپتید دیگر یکی 44 آمینو اسیدی در انتهای آمین (با مشخصات پپتیدهای نشانه مسیر ترشحی sec) و دیگری 193 آمینو اسیدی در انتهای کربوکسیل است. آنزیم بدون پپتید انتهای کربوکسیل km و kcat بیشتری را در مقابل دو سوبسترای نشاسته و eps نشان میدهد. برای بررسی نقش این پپتید در ترشح آنزیم چهار فرم نوترکیب مختلف از bka با و بدون پپتیدهای انتهای آمین و انتهای کربوکسیل[bka, bka?(c193), bka?(n44) and bka?(n44c193)] در باکتری e. coli bl21 تولید شدند. آنزیمهای با پپتید انتهای کربوکسیل بیشتر از دو فرم دیگر به محیط کشت ترشح میشدند که نشانهای از نقش این قطعه در ترشح آنزیم است که در این مطالعه به تفصیل در مورد آن بحث میشود. به علاوه حضور فرمهای آنزیمی فاقد پپتید نشانه انتهای آمین در محیط کشت ترشح غیر وابسته به پپتید نشانه را نشان میدهد که میتواند به علت تشکیل ساختار کره مذاب در محیط اسیدی اطراف فسفولیپیدهای غشایی باشد. تشکیل ساختار کره مذاب دو فرم آنزیمی bka?(n44) و bka?(n44c193) در محیطهای اسیدی با فلورسانس ذاتی، و اتصال ans تایید شد.
منابع مشابه
1077-1083 JMB11-11085.fm
Previously, an extracellular α-amylase (BKA) had been purified from the culture of Bacillus sp. KR8104. Subsequently, the crystal structure of the active enzyme revealed a 422 amino acids polypeptide. In this study, the bka was cloned into E. coli, which encoded a polypeptide of 659 amino acids including two additional fragments: one 44 residues N-terminal fragment and another 193 residues C-te...
متن کاملProperties of an amylase from thermophilic Bacillus SP
α-Amylase production by thermophilic Bacillus sp strain SMIA-2 cultivated in liquid cultures containing soluble starch as a carbon source and supplemented with 0.05% whey protein and 0.2% peptone reached a maximum activity at 32 h, with levels of 37 U/mL. Studies on the amylase characterization revealed that the optimum temperature of this enzyme was 90°C. The enzyme was stable for 1 h at tempe...
متن کاملOptimization, production and partial purification of extracellular α- amylase from Bacillus sp. marini
The aim of the current study was to isolate amylase producing bacteria from the soil samples collected from marine environment of Andaman and Nicobar Islands, India. The isolation was performed by serial dilution and plating method. Total 35 bacteria were isolated from the collected soil samples. All isolates were screened for amylolytic activity by starch agar plate method, among 35 bacterial ...
متن کاملCrystallographic analysis of maltohexaose-producing amylase from alkalophilic Bacillus sp.707
Preparation and crystallization G6-amylase from alkalophilic Bacillus sp.707 was expressed by Bacillus subtilis 207-25. The enzyme was crystallized by the hanging drop vapor diffusion method using the reservoir solution containing 50% (v/v) 2methylpentane-2, 4-diol, 100 mM Tris-HCl (pH 8.5) and 200 mM ammonium phosphate. Calcium chloride and sodium chloride were added to final 1 mM in the drop ...
متن کاملIsolation and identification of α-amylase producing Bacillus sp. from dhal industry waste
A bacterial strain was isolated from dhal industry red gram waste and identified as Bacillus. A thermostable extracellular amylase was partially purified from the strain. Optimum temperature and pH for the enzyme were found to be 60°C and 6.5, respectively. The maximum amylase production was achieved with maltose as carbon source. Among the nitrogen sources, peptone and yeast extract produced m...
متن کاملSecreted expression of a hyperthermophilic α-amylase gene from Thermococcus sp. HJ21 in Bacillus subtilis.
The hyperthermophilic α-amylase from Thermococcus sp. HJ21 possesses unique traits (Ca(2+)-independent thermostability and optimal temperature of 95°C) that make it a great potential candidate for use in the food industry. However, this Archaea isolated from a deep-sea thermal vent requires strict control of culture conditions and produces only small amounts of α-amylase. To solve these problem...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس - دانشکده علوم پایه
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023