بیان ژن hbs ازatcc 6633 bacillus subtilis با استفاده از روش های بیوشیمیایی و مهندسی ژنتیک

میکروارگانیسم ها برای سازمان دهی و بسته بندی dnaی خود از تعدادی پروتئین بازی کوچک استفاده می کنند. این پروتئین ها بر روی بیان ژن، رفتار رشد و قابلیت زیست میکروارگانیسم ها، تاثیر عمیقی دارند. این پروتئین ها‏‏ْ‎‏ًٌٍٍُِ‏ٌُ، پروتئین های شبه هیستونی نامیده می شوند.یکی از پروتئین های شبه هیستونی که به خوبی مطالعه شده است، پروتئین hu از باکتری e.coli می باشد. پروتئین hbsu از bacillus subtilis یکی از اعضای خانواده بزرگ پروتئین های شبه هیستونی است.این پروتئین توسط ژن hbs رمز می شود. در این مطالعه، به منظور تولید مقدار زیادی از پروتئین hbsu، ژن hbs همسانه و بیان شد. تولید مقدار زیادی از پروتئین نوترکیب، مراحل بعدی کار را تسهیل می کند. dna ژنومی متعلق به باکتری atcc 6633 b.subtilis استخراج شد و با پرایمرهای طراحی شده، واکنش pcr انجام گردید. سپس محصول pcr تخلیص شد و در حامل بیانی pet28a(+)، همسانه گردید. پلاسمید نوترکیب در باکتری e.coli dh5? تراریخت شد. به منظور تایید همسانه سازی ، از سلول های تراریخته، پلاسمید استخراج شد. پلاسمید استخراج شده به وسیله pcr آنالیز شد. سپس محصول pcr تعیین توالی گردید. پلاسمیدهای نوترکیب دارای ژن hbs، به میزبان بیانی bl21 تراریخت شدند. برای بیان ژن hbs، کلونی های مثبت در محیط کشت lb دارای ?g/?l50 کانامایسین، کشت داده شدند. سپس iptg (mm1) به عنوان القاگر به محیط کشت افزوده شد. برای اطمینان از بیان ژن همسانه شده، sds-page انجام شد و محصول kd11 پروتئین نوترکیب مشاهده گردید. پروتئین نوترکیب با ستون ni-nta تخلیص گردید. در این مطالعه، با موفقیت ژن hbs همسانه و بیان شد و پروتئین نوترکیب تخلیص گردید.