کلون کردن ژن ns-ltp (non-specific lipid-transfer protein) برنج با برچسب gst به داخل باکتری اشرشیا کلی

پروتئین های ناقل لیپید (ltps) گروهی از پروتئین ها با وزن ملکولی متوسط در نزد گیاهان هستند که دارای پتانسیل های کاربردی به ویژه در سیستم های رها سازی دارو می باشند. هدف از این تحقیق، کلون کردن ژن ltp2 مربوط به گیاه برنج(oryza sativa) در وکتور بیانی pgex-6p-2، در باکتری e.coli (top10) جهت تولید پروتئین به صورت متصل با gst می باشد. از آنجائیکه ژن ltp2 در گیاه برنج را فاقد اینترون است این ژن با کمک تکنیک ژنومیک pcr تکثیر گردید. در سمت 5? پرایمر forward، جایگاه برش bamhi و در سمت 5? پرایمرreverse، جایگاه برش xhoi قرار داده شد. پس از تیمار قطعه تکثیر شده با آنزیم های آندونکلئاز ، قطعه برش یافته به داخل ناحیه bamhi- xhoi وکتور و در پائین دست gst وارد شد. در مرحله بعد وکتور نوترکیب به داخل باکتری e.coli (top10) ترانسفورم شد. به منظور اطمینان از تولید وکتورهای نوترکیب، توالی مربوط به ژن ltp2 توسط تکنیک توالی یابی بررسی و تایید گردید. عصاره باکتری ترانسفورم شده توسط تکنیک sds-page بررسی و بیان ltp در باکتری تایید شد.