طراحی یک روش ایمونوفلورسانس بر پایه ذرات کوانتومی جهت تعیین میزان ca 125 در بیوپسی بافت بیماران مبتلا به سرطان تخمدان

مقدمه: سرطان تخمدان رایج ترین علت مرگ و میر ناشی از سرطان دستگاه ژنیتال و پنجمین علت مرگ و میر ناشی از سرطان در خانمها می باشد. این سرطان معمولاً تا مراحل پیشرفته بیماری تشخیص داده نمی شود و به همین دلیل میزان بقاء در بیماران مبتلا به نحو قابل توجهی پائین است. یکی از شناخته شده ترین تومورمارکرهای سرطان تخمدان، مولکول هیپرگلیکوزیله ca 125 است که بیان آن در سرطان تخمدان افزایش یافته و به عنوان یک مارکر تشخیصی مورد استفاده قرار می گیرد. نانو کریستال های نیمه هادی جدید، نانو ذرات کوانتومی، در مقایسه با فلوروفورهای آلی دارای مزایای متعددی از جمله بازده کوانتومی بالا و پایداری درخشش بوده و به همین سبب امروزه به طور وسیعی در تصویربرداری سلولی و ردیابی مولکولی، بویژه در تحقیقات سرطان مورد استفاده قرار می گیرند. هدف از این مطالعه افزایش حساسیت تشخیص ca 125 با استفاده از نانو ذرات کوانتومی (qd 525) و بررسی توان بالقوه این نوع پروب ها در تشخیص زودرس سرطان تخمدان می باشد. مواد و روشها: تولید آنتی بادیهای منوکلونال ضد ca 125 با استفاده از روش هیبریدوما پس از ایمن سازی موشها به روش prime-boost انجام شد و پس از ایمن سازی موشها، آنتی بادی ها از سوپ کشت سلول تخلیص و خصوصیات آنها به روش الایزا، وسترن بلات، ایمونوپرسیپیتاسیون، رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس سلول زنده و فیکس شده ovcar-3 و فلوسیتومتری بررسی شدند. به منظور استفاده از رنگ آمیزی های ایمونوفلورسنت، استرپتو آویدین با fitc و525 qd کونژوگه و خواص نوری هر دو فلوروفور شامل شدت فلورسانس، اندیس رنگ آمیزی، ثبات نوری و همچنین حداقل میزان میانکنش در رنگ آمیزی ایمونوفلورسنت رده سلولی و بافت سرطان تخمدان با هم مقایسه گردید. نتایج : در مجموع ده کلون ضد ca 125 بدست آمد که ایزوتیپ هفت آنتی بادی igm و بقیه از نوع igg بود. کلون های igm دارای واکنشگری بهتری بوده و قادر به شناسایی آنتی ژن مربوطه در تمام آزمون های فوق بودند. در رنگ آمیزی ایمونوفلورسنت qd 525 نسبت به fitc به طوری قابل توجهی (حداقل سه برابر) درخشنده تر بود (0001/0p<). اندیس رنگ آمیزی qd 525 حداقل پنج برابر fitc برآورد گردید، حداقل میزان واکنشگری آنتی بادیهای منوکلونال ضد ca 125 (minimal reactivity limit) با استفاده از کونژوگه qd 525 نسبت به fitc، چهار برابر افزایش یافت. qd 525 در مقایسه با fitc، ثبات نوری بالاتری داشت. بحث: با توجه به خصوصیات فوری منحصر به فرد نانو ذرات کوانتومی، به نظر می رسد که از این ذرات بتوان در افزایش حساسیت روشهای تشخیصی ca 125 و در نتیجه تشخیص زودرس سرطان تخمدان بهره جست.