طراحی و ساخت وکتورهای ویروسی حامل ژن های زنجیره سبک و سنگین آنتی بادی مونوکلونال هرسپتین و بررسی بیان آن در سلول های یوکاریوتی

پایان نامه
  • وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک وزیست فناوری
  • نویسنده سحر شجاعی
  • استاد راهنما موسی گردانه
  • سال انتشار 1389
چکیده

چکیده: رسپتور her2 از خانواده تیزوزین کیناز ها می باشد که بیان بیش از حد آن در ایجاد سرطان های مختلف از جمله سرطان سینه ، پروستات ، کلون و تخمدان نقش مهمی دارد.هرسپتین اولین آنتی بادی مونوکلونال مورد تایید برای درمان سرطان سینه بدخیم +her2 است.به منظور تولید این آنتی بادی مونوکلونال ژن آن با استفاده از توالی پروتئینی آن در genebank سفارش وسنتز شد. برای اطمینان از تولید پروتئین با folding صحیح سلول های هدف با توجه به humanized بودن این آنتی بادی سلول های یوکاریوتی رده ی hek 293t انتخاب شدند. ژن زنجیره سبک و سنگین را در بدنه لنتی ویروسی به همراه توالی ires کلون کردیم. به منظور تولید ویروس نوترکیب، وکتور حامل به همراه وکتور های packaging و envelope با روش کلسیم - فسفات ترانسفکت شدند و پس از 48 ساعت محیط کشت این سلول ها تغلیظ و پس از تست تولید هر دو زنجیره باتکنیک rt-pcr سلول های hek 293t را با لنتی ویروس های تغلیظ شده infect کردیم.پس از 72 ساعت تولید هر دوزنجیره دوباره با rt-pcr تست شد.از آنجایی که هرسپتین ترشحی است ، پروتئین های محیط کشت سلول های infect شده را با tca رسوب داده وبیان را با تکنیک sds-page سنجیدیم .با توجه به نتیجه مثبت ، تاخوردگی و اتصال آن را به گیرنده her2 در سطح رده های سلولیmcf-7 وskbr3 با تکنیک ایمونوسیتوشیمی بررسی و نور فلورسنت را در هر دو رده مشاهده نمودیم. mtt assayنیز عملکرد صحیح این پروتئین را در جهت توقف رشد رده ی mcf-7و مرگ سلولی رده ی skbr3 نشان داد.

منابع مشابه

طراحی و ساخت حامل لنتی ویروسی بیان کننده miRNA-499a و انتقال آن‌ به سلول ‌های بنیادی مزانشیمی انسان

Background and purpose: Lentiviral vectors (LVs) are suitable candidates for gene delivery to cells with stable and high-level of transgene expression in target cells. MicroRNAs (miRNAs, miRs) are non-protein coding, short (~22 nucleotides) and single-stranded RNAs that act as post-transcriptional regulators of gene expression, and are involved in various cellular processes, including prolifera...

متن کامل

طراحی وکتور لنتی ویروسی بیان کننده ژن آپوپتین و تاثیر سایتوتوکسیک آن در سلول های لوسمی لنفوبلاستیک حاد Reh

سابقه و هدف: مقاومت به داروهای شیمی درمانی یکی از مهمترین مشکلات درمانی بیماران مبتلاء به لوسمی لنفوبلاستیک حاد (Acute lymphoblastic leukemia) می­باشد. آپوپتین به دلیل توانایی القاء اختصاصی آپوپتوز در سلول­های توموری، پتانسیل انکار ناپذیری در درمان سرطان به خصوص مواردی که به شیمی درمانی پاسخ کمتری می­دهند، دارد. از این رو، در این مطالعه اثر القاء بیان آپوپتین را در القاء مرگ سلولی در لنفوبلاست­...

متن کامل

Degenerate Four Wave Mixing in Photonic Crystal Fibers

In this study, Four Wave Mixing (FWM) characteristics in photonic crystal fibers are investigated. The effect of channel spacing, phase mismatching, and fiber length on FWM efficiency have been studied. The variation of idler frequency which obtained by this technique with pumping and signal wavelengths has been discussed. The effect of fiber dispersion has been taken into account; we obtain th...

متن کامل

بررسی خواص بیولوژیکی ترکیب نشاندار:Herceptin 99mTc -DTPA- در سلول های سرطانی

سابقه و هدف: هرسپتین یک آنتی بادی مونوکلونال انسانی، علیه آنتی ژن HER2 است که برای درمان سرطان های پستان در مراحل ابتدایی که بیان کننده آنتی ژن HER2هستند، مورد استفاده قرار میگیرد. هرسپتین، پتانسیل استفاده به عنوان داروی رادیوایمونوسنتی گرافی در تشخیص سرطان های بیان کننده HER2را دارد. در این تحقیق نشاندارسازی آنتی بادی هرسپتین با تکنسیم، به عنوان اولین قدم در تولید یک رادیوداروی جدید تشخیصی،...

متن کامل

تولید و کنترل کیفی آنتی بادی مونوکلونال نشان دار با تکنسیم 99m علیه سلول های سرطانی کولون

Background and purpose: Binding a monoclonal antibody to tumor associated antigens is an effective method for cancer therapy because these agents can specifically target malignant cells. In fact, monoclonal antibodies are effective agents for diagnosis, grading and treatment of different kinds of cancers. In this research, a new monoclonal antibody against colon cancer cells was prepared and ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک وزیست فناوری

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023