تکوین و توسعه ی تست rt-pcr برای شناسایی ویروس های اگزوژن و آندوژن لکوز پرندگان در واکسن های تجاری طیور

ویروس های لکوز- سارکوم پرندگان از جمله عوامل مهم بیماریزای طیور می باشند. این ویروس ها منشاء خسارات اقتصادی فراوانی در صنعت طیور می باشند. با توجه به وفور آلودگی با این ویروس ها، تخم مرغ های نطفه دار از جمله منابع آلودگی می باشند. علیرغم پیشرفت های حاصله در صنعت واکسن سازی تخم مرغ جنین دار کماکان از مهمترین ابزارها برای تولید واکسن های انسانی و حیوانی می باشند. لذا واکسن های تولیدی می توانند به این ویروس ها آلودگی گردند. آلودگی واکسن های انسانی، دامی و پرندگان با عوامل خارجی توسط محققین بسیاری گزارش شده است. بر اساس اطلاعات موجود، روشهای مرسوم و مولکولی برای غربالگری محصولات بیولوژیک وارداتی و تولید داخل از نظر آلودگی با عوامل خارجی در گستره ملی در دسترس نمی باشد. این نقیصه می تواند دستگاه های نظارتی و اجرایی را در انجام هر چه دقیق تر وظایف خود با محدودیت مواجه نماید. در صورتی که روشهای جایگزین کاملا اعتبارسنجی شده در دسترس قرار گیرند در مقایسه با روش های مرسوم می توانند مورد پذیرش مراجع ذی صلاح قرار گیرند. این پژوهش با هدف راه اندازی یک تست مبتتنی بر واکنش زنجیره ای پلیمراز برای ردیابی alvs در نمونه های بیولوژیک از جمله واکسن ها صورت پذیرفت. در این پژوهش، یک تست rt-pcr بر اساس پرایمرهای انتشار یافته راه اندازی و بهینه سازی گردید و برای تست نمونه های کلینیکی مشکوک و نمونه های آلبومین تخم مرغ های جنین دار بکار گرفته شد. جهت دسترسی به نمونه کنترل مثبت در تست های مربوطه، متعاقبا محصول pcr بدست آمده از نمونه های آلبومین کلون شد. تعیین حساسیت تست نیز روی رقت های متوالی 10 تایی از پلاسمید نوترکیب انجام گفت تا حساسیت تست تعیین گردد. در نهایت، اقدام به غربالگری تعداد محدودی از واکسن های طیور از نظر آلودگی با رتروویروس پرندگان گردید اما آلودگی یافت نشد. در حقیقت، با توجه به عدم انجام تست nested pcr روی نمونه ها، یافت نشدن آلودگی در واکسن ها مساله آلودگی را بطور قطع منتفی نمی کند. برای نیل به نتایج معتبر، تست nested rt-pcr قویا توصیه می گردد. تست nested rt-pcr مربوطه می تواند به عنوان یک روش سریع با حساسیت و ویژگی بالا جهت کشف آلود گی واکسن های طیور، در راستای کنترل کیفی واکسن های طیور و همچنین ردیابی عفونت ها و بیماریهای ناشی از این ویروس ها در گونه های مختلف پرندگان بکار رود. البته اعتبار سنجی و ارزیابی تست تکوین یافته، نیازمند غربالگری تعداد زیادی از و اکسن ها در بعد ملی و مقایسه نتایج بدست آمده با سایر روش ها از جمله جداسازی ویروس می باشد. توجه: در آغاز انجام این پایان نامه قرار بر این بود که طراحی پرایمر ها و توسعه تست توسط محقق انجام شود ولی بواسطه مشکلات عدیده در اخذ نمونه کنترل مثبت برای هر یک از تحت گروه ها و محدودیت زمانی این امر میسر نگردید و از پرایمر های انتشار یافته در مقالات بهره گرفته شد. لذا عنوان پایان نامه تحت عنوان ذیل صحیح می باشد: "راه اندازی (establishment) تست rt-pcr برای شناسایی ویروس های اگزوژن و آندوژن لکوز پرندگان در واکسن های تجاری طیور"