بررسی جایگاه درون سلولی آنزیم sk1-1/s1p در لاین سلولی cos-7 ترانسفکت شده با وکتور pires-hski-v5
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس
- نویسنده آناهیتا حمیدی
- استاد راهنما جواد مولی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1381
چکیده
آنزیم site-1-protease/subtilisin-kexin isozyme-1)sip/ski-1) پروتئازی است که بر خلاف precursor convertase)pc )های پستانداران ، سوبسترای خود را پس از آمینواسید های هیدروفوب درتوالی x- arg/lys)-x-(hydrophobic)-(l,t))برش می دهد. به نظر می رسد که آنزیم در er، دستگاه گلژی و یا وزیکول های ترشحی وجود دارد، ولی احتمالا در دستگاه گلژی فعالیت خود را انجام می دهد. مشخص نمودن جایگاه درون سلولی آنزیم sip/ski-1 در لاین سلولی cos-7 هدف اصلی این تحقیق بوده است. پس از تکثیر ژن مورد نظر به روش ماکسی پرپ، سلولهای cos-7با رکتور پلاسمیدی (حاوی dnacی کدکننده sip/ski-1-v5 ) ترانسفکت شد و از آنجایی که cdnaی پروتئین egfp در وکتور به عنوان گزارشگر حضور داشت، به روش فلورسانس میکروسکوپی و نیز روش فلوسیتومتری سطح بیان و درصد سلولهای ترانسفکت شده مشخص شد. وجود سیگنال مثبت در تصاویر میکروسکوپ فلورسنت انجام دادن موفقیت آمیز ترانسفکشن را تایید کرد. برای اثبات بیان شدن sip/ski-1 ، واکنش rt-pcr انجام شد. سپس ایمنوهیستوشیمی بر روی تک سلولی ترانسفکت شده با استفاده از آنتی بادی بر علیه وصله v5-tag که به قسمت c-terminal ژن اضافه شده است انجام شد. نتایج حاصل از ایمنوهیستوشیمی نشان داد که آنزیم در ساختارهایی شبیه er و دستگاه گلژی قرار دارد اما توزیع رنگ آمیزی در اطراف هسته بیشتر از قسمتهای دیگر است. مشاهده سلولهای سبز رنگ با میکروسکوپ فلورسنت، نشان داد که استفاده از روش لیپوفکشن برای انتقال ژن به سلولهای کشت داده شده پستانداران موفق بوده است. الگوی رنگ آمیزی در ایمنوهیستوشیمی ضمن اینکه فرضیات قبلی را در مورد محل استقرار درون سلولی آنزیم تایید می کند، پیشنهاد می کند که آنزیم در er و دستگاه گلژی قرار دارد و فعالیت می کند.
منابع مشابه
اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملبررسی بیان ژن survivine در لاین سلولی DU145 سرطان پروستات تیمار شده با قارچ کمبوجا
سابقه و هدف: سرطان پروسـتات دومیـن بدخیمـی رایـج در مـردان اسـت. در مطالعه حاضر به بررسی اثر عصاره کمبوجا بر لاین سلولی DU145 سرطان پروستات و تغییر بیان ژن Survivine در سلول های سرطانی پرداخته شده است که این ژن یکی از ژن های درگیر در مسیر مهار آپوپتوز است. مواد و روش ها: به این منظور عصاره قارچ کمبوجا بر لاین سلولی مذکور اثر داده شد و میزان میرایی سلول با روش MTT و تغییر بیان ژن Survivine نی...
متن کاملساب کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش سوری در وکتور لنتی ویرال و انتقال آن به رده سلولی HEK
سابقه و هدف: ژن‌درمانی یکی از مهمترین شیوه‌های تحقیقات بالینی است که ارایه‌دهندهی روش‌های جدیدی برای درمان نقص‌های ژنتیکی می‌باشد. نقص ژنتیکی آنزیم گلوکوسربروزیداز ( Gba ) عامل بیماری گوشه بیش از بقیه‌ی بیماری‌ها در ژن‌درمانی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از انجام این پروژه کلونینگ و انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز توسط لنتی ویرال وکتور ارتقایافته به رده‌ی سلولهای HEK می‌باشد. مواد و روشها:...
متن کاملتأثیر سیلیبینین بر القاءآپوپتوز و مهار رشد سلولی در رده سلولی MCF-7 سرطان پستان
سابقه و هدف: سرطان پستان یکی از رایج‌ترین عوامل مرگ و میر ناشی از بدخیمی در زنان است. سیلیبینین یک ترکیب فلاونولیگنان از گیاه خار مریم (Silybum maianum) استخراج شده و ویژگی ضد سرطانی آن در سلولهای کبدی مورد بررسی قرار گرفته است. در این مطالعه اثر سیلیبینین بر میزان بیان ژنی P53، رشد و آپوپتوز در رده سلولی MCF-7 مورد بررسی قرار گرفته است. مواد و روشها: با کشت سلولهای MCF-7 در RPMI1640 و تیمار...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023