هویت یابی مولکولی نتایج موش های بارور شده به روش ‏‎ivf‎‏ با استفاده از نشانگرهای ‏‎microsatellite‎‏ برای ردیابی حیوانات ترانسژنیک

هدف از این تحقیق مهیا کردن بعضی از تکنیک ها برای دستکاری جنین های موش و هویت یابی آنها به منظور شروع فعالیت ترانسژنیک در کشورمان بود. اسپرم ها و اووسیت ها از موش های ‏‎cxbfi(c57bl/6*balb/c) که به وسیله برنامه های اصلاحی حیوان تولید شده بودند، استخراج گردیدند. جنین های مرحله دو سلولی حاصل از باروری آزمایشگاهی ‏‎‏‎(ivf)‎‏، بدرون اویدوکت موشهای ماده آبستن کاذب ‏‎balb/c‎‏ به روش ‏‎zift‎‏ انتقال یافتند. قبلا این موش های دایه بوسیله نرهای وازکتومی شده و استریل ‏‎(c57bl/6)‎‏ القا شده بودند. نتایج حاصل به کمک استخراج ‏‎dna‎‏ از دم هایشان و تجزیه و تحلیل واکنش زنجیره ای پلی مراز ‏‎(pcr)‎‏ با استفاده از مارکرهای میکروساتلایت که در نقشه برداری سریع سازماندهی ژنوم خیلی مفید هستند، هویت یابی گردیدند. لوکوس های تکراری توالی کوتاه ‏‎(strs) قرار گرفته شده در ژن ‏‎tnf‎‏، ناحیه ‏‎mhc‎‏ و در لوکس ‏‎cypla2‎‏ مورد استفاده قرار رگفتند و نمونه ها به روش رنگ آمیزی نقره ردیابی گردیدند. این شیوه، تجزیه و تحلیل غیر ایزوتوپی و ارزان را برای هویت یابی ‏‎dna‎‏ آماده می سازد. امروزه از بین پستانداران، موش با کاربرد بالقوه زیاد خود، برای تحقیق گسترده در تنظیمات ژنی بافت خاص و مرحله توسعه ای ویژه و همچنین برای آزمایش های مربوطه به اثرات فنوتیپی بیان ترانسژن انتخاب گردیده است. چون زمینه ژنتیکی حیوان موردنظر در این آزمایش مشکل ساز بود، اغلب تیمارها با زیاگوت های هیبرید ‏‎f2‎‏ که حاصل تلاقی بین موش های ماده و نر هیبرید ‏‎cxbf1‎‏ بودند، انجام شدند. ‏‎ivf‎‏ در این مطالعه برای آماده سازی بستر انتقال ژن مهندسی شده با میانجیگری اسپرم، بجای باروری در زیوه و متعاقب آن بازیافت جنین، صورت پذیرفت. تقریبا 60 درصد از 180 تخمک مانا با شهود دو پرو-نوکلئوس بارور گردیدند و 13 درصد از این جنین ها در هر موش به درون رحم مادری های آبستن کاذب جایگزین شدند. این نتایج حاصل و ردیابی مولکولی دقیق آنها بوسیله ‏‎str‎‏ های بالا، تکنیک های بکار رفته را تایید کردند.