جداسازی و تخلیص آنزیم استیل کولین استراز از مغز گوساله و مقایسه اثرات مهارکنندگی د و داروی فیزوستیگمین و پروکائین

آنزیم استیل کولین استراز ‏‎(ache)‎‏ به صورت واحدهای مونر، دی و تترامر بوده و بصورت کلی ‏‎g‎‏ نمایش داده می شود. آنزیم استیل کولین استراز از بافت ‏‎caudate nucleus‎‏ مغز گوساله جداسازی و تخلیص گردیدو از نظر میزان مهار شوندگی توسط دو داروی فیزوستیگمین و پروکائین هیدروکلراید در ‏‎in ritro‎‏ بررسی شد. در ابتدا آنزیم ‏‎ache‎‏ از بافت مغز گوساله توسط روش هموژناسیون و سانتریفوژ در چند مرحله در غلظت 32/0 مولار سوکروز و حاوی یک میلی مول ‏‎edta‎‏ استخراج گردید و سپس توسط سولفات آمونیوم 30% رسوب داده شد. پس از آن با کروماتوگرافی تعویض یونی (توسط ‏‎(deae-cellulose)‎‏ و ژل فیلتراسیون (توسط ژل 200 - ‏‎g‎‏) دو پیک حاوی فراکنش های مختلفی که دارای فعالیت استیل کولین استراز بالایی میباشند بدست آمد. آنزیم استیل کولین استراز با فعالیت مخصوص ‏‎74/5iu/mg‎‏ به دست آمد که 86 برابر افزایش فعالیت را نشان می دهد. مقادیر ‏‎km, vmax‎‏ آنزیم با سوبسترای استیل تیوکولین به ترتیب برابر ‏‎52/63u m/ml/mg‎‏ و 11/0 میلی مولار مشخص شد. الکتروفورز با ژل 10 درصد پلی اکریل آمید سدیم دو دسیل سولفات نیز باند مربوط به آنزیم را نشان می دهد. آنالی زالکتروفورزی استیل کولین استراز، جرم مولکولی ‏‎67000+-3000d‎‏ برای زیر واحد مونومر را نشان داد. ‏‎*‎‏ ‏‎ic50‏ برای داروهای پروکائین و فیزوستیگمین به ترتیب برابر 87/0 و 49/4 - 10 میل یمولار به دست آمد که نشان دهنده قدرت بالای مهارکنندگی داروی فیزوستیگمین نسبت به پروکائین می باشد. همچنین پارامترهای کینتیکی آنزیم ‏‎ache‎‏ در حضور این داروها مطالعه گردیدند. بطوریکه ‏‎km‎‏ آنزیم در حضور پروکائین و فیزوستیگمین به ترتیب برابر 65/0 و 22/2 میلی مولار به دست آمد. ‏‎vmax‎‏ آنزیم در حضور داروها و در عدم حضور داروها یکسان و برابر ‏‎52/63 um/ml/mg‎‏ مشخص گردید که این دو دارو به عنوان مهارکننده های رقابتی آنزیم فوق معرفی می گردند. ‏‎ic50‎‏: غلظتی از دارو که باعث مهار 50 درصد آنزیم می شود.