خالص سازی و بررسی تعدادی از اکتینومیستهای بخشی از میکروفلور ایران

بااستفاده از متدی مناسب و محیط کشت نوترینت براث که تقریبا اکثر جنس های گروههای مختلف رده اکتینومیستال در آن قابلیت رشد دارند، تعداد زیادی میکروارگانیسم از خاک جداگردید که برای انتخاب کلنی اکتینومیست ها معیار، شباهت کلنی ها بوده است . ازمیان 134 کلنی انتخاب شده، 29 کلنی از آنها بااثرمناسب بر باسیلوس سوبتیلیس ، به عنوان میکروارگانیسم های تولید کننده آنتی بیوتیک برگزیده شدند. دمای انکوباسیون کشت ها، دمای اتاق بوده است (25-30 درجه سانتی گراد) . میکروارگانیسم های بدست آمده بصورت p1 تا p29 نامگذاری گردیده و یکی از آنها با نام p2 برای مطالعه بیشتر انتخاب گردید. میکروارگانیسم p2 با آزمایشات انجام شده، مشخص گردید که دارای اختصاصات cell wall type iii-wcsp type c-phosphlipid type ii or iii or iv می باشد . با این خصوصیات شیمیایی، میکروارگانیسم p2 رامی توان به یکی از دو جنس thermomonospora و nocardiopsis نسبت داد و بدین صورت این میکروارگانیسم متعلق به خانواده یا گروه thermomonospora and related genera براساس طبقه بندی کتاب bergeys manual of systematic bacteriology , vol . 4 (1989) می باشد. خصوصیات فیزیولوژیک این میکروارگانیسم به شناسایی و تفرق بین دو جنس فوق کمکی نمی نماید و برای اینکار باید با کمک میکروسکوپ با بزرگنمایی مناسب مانند میکروسکوپ الکترونی، ساختمان اسپورمیکروارگانیسم p2 مشخص شود. باآزمایشات انجام شده، طول موج جذب uv ماده آنتی بیوتیکی، 400 نانومتر تعیین گردید. بهترین منبع کربن از میان 3 منبع تست شده، مانیتول و بهترین مبنع نیتروژن از میان 3 منبع تست شده فنیل آلانین تعیین گردید. بهترین زمان تولید، با 2ˆ1 از اینوکولوم شبانه، روز سوم بخصوص ساعتهای 54-45 می باشد . دمای 32 درجه سانتی گراد برای تولید بیشتر، مناسب می باشد . در ph حدود 35ˆ6 کیفیت تولید آنتی بیوتیک مناسب تر است . محیط پیشنهادی برای تولید آنتی بیوتیک توسط میکروارگانیسم p2بصورت ذیل می باشد : mannitol 1.0 phenyl alanine 0.5 yeast extract 0.25 distilled water 100ml محیط پیشنهادی برای بدست آوری آنتی بیوتیک ، ساده و بدون اکثر مواد کمپلکس طبیعی می باشد، ازاینرو امر جداسازی با امکانات موجود سریعتر و بهتر صورت می گیرد. درامرکروماتوگرافی، حلال استونیتریل - ایزوپروپانول (4:6) می تواند اجزاء مختلف براث میکروبی راازیکدیگر مجزا کند و حلال فوق را می توان برای جداسازی در کروماتوگرافی ستونی بکار برد . همچنین از آنجا که ماده آنتی بیوتیکی قادر به جذب یون هیدروژن اسیدی میباشد می توان از پلیمرهای تعویض یونی نیز استفاده نمود که این امر به اطلاعات بیشتر در مورد ماده آنتی بیوتیکی نیاز دارد . آنتی بیوتیک تولید شده بر باسیلوس سوبتیلیس ، اشریشیاکلی و سالمونلا موثر می باشد واین نشاندهنده اثر غیر انتخابی آنتی بیوتیک بدست آمده به گرم مثبت ها و یا گرم منفی ها می باشد . همچنین اثری بر دو قارچ کاندیدا آلبیکانس و آسپرژیلوس نیجر نداشته است ، بنابراین آنتی بیوتیک وسیع الطیف نمی تواند باشد.