طراحی و ساخت BCG نوترکیب حاوی ژن سیتوزین دآمیناز به منظور ارتقا کارایی BCG اینتراوزیکال در درمان سرطان مثانه

زمینه و اهداف: سرطان مثانه دومین سرطان شایع دستگاه ادراری- تناسلی در جهان است. ایمونوتراپی با BCG درمان انتخابی این سرطان می باشد. روش دیگر، ژن درمانی سرطان مثانه با سیستم (Cytosine Deaminase/5-Fluorocytosine (CD/5-FC است. هدف از ساخت شاتل وکتور مایکوباکتریال، انتقال ژن سیتوزین دآمیناز (CD) به BCG با روش الکتروپوریشن بود تا با تبدیل 5-FC به 5-Fluorouracil)5-FU) توسط آنزیم CD، سلول های توموری بیشتری نابود شوند. روش بررسی: قطعات ژنی شاتل وکتور مایکوباکتریال شامل، پروموتر hsp60، توالی سیگنال آلفا آنتی ژن و ژن CD مخمر (Saccharomyces cerevisiae) پس از تکثیر با PCR و هضم آنزیمی و با استفاده از فناوری های کلونینگ در پلاسمید pBTGGT و pVN2 به ترتیب کلون و ساب کلون شدند. پلاسمید نهایی با روش الکتروپوریشن به داخل BCG هدایت گردید و وجود آن در BCG بررسی شد. یافته ها: نتایج تعیین توالی وکتور نهایی صحت آن را تایید و وکتور pHARA نامگذاری شد. سلول هایی که pHARA را دریافت کردند پس از 17 روز روی محیط میدل بروک 7 H10 حاوی غلظت نهایی 20 mg/ml کانامایسین، کلنی تشکیل دادند. نتیجه گیری: BCG نوترکیب فوق علاوه بر فراخوانی موضعی سیستم ایمنی، با تبدیل داروی 5-FC به 5-FU توسط آنزیم CD، می تواند سلول های توموری بیشتری را نابود نماید