معرفی یک تست برای شناسایی و تفریق ویروسهای آنفلوانزا a تحت تیپ h5 با بیماریزایی بالا (hpai) و بیماریزایی اندک (lpai) به روش real-time rt-pcr و آنالیز منحنی ذوب (melting curve analysisi)

بیماری آنفلوانزای فوق حاد ناشی از ویروس آنفلوانزا a تحت تیپ h5n1 در دههی اخیر از افزایش قابل توجهی برخوردار بوده است . شیوع این بیماری در جمعیت پرندگان بسیاری از کشورهای آسیایی، اروپایی و آفریقایی مشاهده شده است. در جمعیت پرندگان ایران نیز این بیماری گزارش شده است. طی شیوع ویروس آنفلوانزای پرنده تعیین پاتوتیپ ویروس برای تصمیم گیری در مورد برخورد با مناطق آلوده بسیار ضروری است. تشخیص مولکولی عمومیترین شیوهی تشخیص بیماری میباشد زیرا نیاز به امکانات bsl3 ندارد. در این پ‍‍‍ژوهش بوسیله روش real-time rt-pcr و آنالیز منحنی ذوب، یک تست مولکولی سریع جهت شناسایی و تفریق سویههای با بیماریزایی بالا و بیماریزایی اندک ویروسهای آنفلوانزا تحت تیپ h5 راهاندازی گردید؛ در همین راستا با بررسی حدود 2000 سکانس نوکلئوتیدی سویههای hpai و lpai دریافت شده از بانک ژنی، هفت عدد پرایمر در مناطق محافظت شدهی دو طرف جایگاه شکست ژن هماگلوتینین طراحی شد. برای تعیین حساسیت تست، رقتهای دهتایی از دو پلاسمید نوترکیب pgem و pcaggs که به ترتیب حاوی ژن هماگلوتینین lpai و hpai میباشند، تهیه گردید. نتایج به دست آمده از این تحقیق نشان داد که این روش قادر به تشخیص حداقل 2 کپی از پلاسمید در هر ماکرولیتر است. در آنالیز منحنی ذوب، پیک اختصاصی مربوط به محصول تحت تیپ h5 با بیماریزایی بالا در دمای 84 درجه سانتیگراد و در مورد سویهی اندک بیماریزا در دمای 82.5 درجه سانتیگراد مشاهده گردید. طراحی این تست نیاز به تعیین توالی جایگاه شکست ژن هماگلوتینین ویروس را جهت تعیین پاتوتیپ مرتفع گردانید. در مطالعات بعدی بایستی تعیین پاتوتیپ ویروسهای به روش استاندارد با روش طراحی شده در این پژوهش در مقیاس وسیع مقایسه گردد. کلمات کلیدی: ویروس آنفلوانزا a تحت تیپ h5، آنالیز منحنی ذوب، تعیین پاتوتیپ.