اثر اسید آسکوربیک بر بلوغ آزمایشگاهی اووسیت های با و بدون سلول های کومولوس در گاو

اسید آسکوربیک (ویتامین c) یک آنتی اکسیدان طبیعی است که سلول های پستانداران را در برابر پراکسیداسیون لیپیدی محافظت می کند. اسید آسکوربیک می تواند به خوبی به عنوان یک پیش اکسیدان هم عمل کند. تخمدان ها و دیگر بافت های درون ریز، مقدار زیادی از اسید آسکوربیک را انباشته می کنند. همچنین اسید آسکوربیک سابقه ی طولانی مدتی در رابطه با تولید مثل داشته و در درمان گاوهای نابارور به کار می رفته است. در این تحقیق تأثیر اسید آسکوربیک بر بلوغ آزمایشکاهی اووسیت های با و بدون سلول های کومولوس در گاو مورد مطالعه قرار گرفت. غلظت های مختلف اسید آسکوربیک (صفر، 150، 200، 250 و 300 میکرومولار) به محیط کشت پایه tcm-199 افزوده شد. تخمدان های گاوی از کشتارگاه منطقه جمع آوری و درون سرم فیزیولوژی با دمای 35-38 درجه سانتی گراد و 1 درصد پنی سیلین-استرپتومایسین، در مدت کمتر از 2 ساعت پس از جمع آوری، به آزمایشگاه منتقل شد. کمپلکس های کومولوس-اووسیت از فولیکول های آنترال (با قطر 2-8 میلی متر)، به روش آسپیره کردن گرفته شد. اووسیت ها پس از ارزیابی، 4 بار درون محیط کشت hepes-tcm-199 که با 5 درصد سرم جنین گاوی و 1 درصد پنی سیلین-استرپتومایسین مکمل سازی شده بود، شستشو داده شدند. سپس حدود 5-10 اووسیت در داخل هر قطره محیط کشت بلوغ، اختصاص یافت و برای مدت 24 ساعت در انکوباتور در دمای 5/38 درجه سانتی گراد، 5 درصد co2 و رطوبت 95 درصد، کشت شدند. محط کشت بلوغ، tcm-199 حاوی سیستم بافر بیکربنات بود که با 10 درصد سرم جنین گاوی(fbs)، 1/0واحد بین المللی در میلی لیتر گونادوتروپین منوپوزال انسانی (hmg)، 1 میکروگرم در میلی لیتر استرادیول و 1 درصد پنی سیلین-استرپتومایسین نیز مکمل سازی شد. پس از 24 ساعت، ابتدا میزان پراکندگی سلول های کومولوس ارزیابی شد و پس از کومولوس برداری، وضعیت هسته ای اووسیت ها در هر تیمار با استفاده از اورسئین 1 درصد ارزیابی شد. یافته های این پژوهش نشان داد که پراکندگی سلول های کومولوس تحت تاثیر غلظت های مختلف اسید آسکوربیک قرار نمی گیرد(05/0>p). غلظت های 250 و 300 میکرومولار اسید آسکوربیک در اووسیت های با کومولوس و غلظت 250 میکرومولار اسید آسکوربیک در اووسیت های بدون کومولوس درصد بلوغ هسته ای را نسبت به گروه شاهد بطور معنی داری افزایش دادند. همچنین در این تحقیق درصد بلوغ هسته ای اووست های با کومولوس در مقایسه با اووسیت های بدون کومولوس در تمام گروه ها بالاتر بود. نتایج این تحقیق نشان داد که غلظت های 250 و 300 میکرومولار اسید آسکوربیک به همراه سلول های کومولوس در محیط کشت تجاری tcm-199 بلوغ آزمایشگاهی اووسیت های گاو را افزایش می دهد.