همسانه سازی و توالی یابی ژن‌های ویرولانسompA و smpA اسینتوباکتر بامانی

چکیده زمینه و هدف: اسینتوباکتر بامانی یک پاتوژن نوظهور و مهم در بروز عفونت‌های مختلف از قبیل؛ عفونت دستگاه ادراری، بیمارستانی، مننژیت و دستگاه تنفسی می‌باشد. هدف از این مطالعه همسانه سازی و توالی یابی ژن­های ویرولانس ompA و smpA اسینتوباکتر بامانی بیماریزا می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه نیمه تجربی، سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی بر روی محیط‌های بلاد آگار و مک کانکی آگار کشت داده شد. تشخیص و تأیید اسینتوباکتر بامانی به روش­های میکروسکوپی، کشت میکروبی و بیوشیمیایی انجام شد. دو ژن ompA و smpA با تکنیک PCR تکثیر و درون وکتور پلاسمیدی pTZ57R/T کلون شدند. صحت سازواره نوترکیب به دو روش PCR و هضم آنزیمی‌ دوگانه انجام شد. دو ژن ompA و smpA  کلون شده در پلاسمید pTZ57R/T توالی یابی شدند. سپس ژن­های ompA و smpA درون وکتور پروکاریوتی ساب کلون گردیده و بیان آنها در باکتری اشرشیا کلی به روش SDS-PAGE  بررسی شد.   یافته‌ها: سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی با روش های بیوشیمیایی و میکروبیولوژی تایید شد. از الکتروفورز محصولات PCR دو باند 1150 و 411 جفت بازی به دست آمد که به ترتیب مربوط به ژن‌های ompA و smpA بود. نتایج انجام PCR و هضم آنزیمی دوگانه روی پلاسمیدهای نوترکیب، درستی تشکیل pTZ57R/T-ompA و pTZ57R/T-smpA را نشان داد. نتایج تعیین توالی، صحت کلون سازی را مشخص نمود.   نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده نشان داد که پلاسمیدpTZ57R/T برای کلون سازی قطعات بزرگDNA مناسب می‌باشد و با توجه به حفاظت شدگی بالای دو ژن ompA و smpA  برای ساخت واکسن می‌توان از آنها استفاده نمود.