مقایسه کمی حساسیت NASBA-ELISA و RT-PCR-ELISA در اندازه گیری رونویس الحاقی ژن های BCR-ABL بیماران مبتلا به CML

Authors

  • فروزنده مقدم, مهدی
  • جوادی, غلامرضا
  • صادقی زاده, مجید
  • هاشمی, مهرداد
Abstract:

سابقه و هدف: بیماران مبتلا به لوسمی میلوئیدی مزمن (CML) دارای کرموزوم فیلادلفیا هستند. این کروموزوم حاصل جابجایی بازوهای بلند کروموزوم های 9 و 22 (q34q11) بوده که منجر به ایجاد الحاق بین ژنهای BCR و ABL می گردد. در این مطالعه، تکنیک های RT-PCR و NASBA در تعیین رونویس های bcr-abl مقایسه شد.روش بررسی: رونویس های الحاقی بطور مصنوعی سنتز و RNA از رده سلولی لوسمیک K562 استخراج گردید. سریال رقت هم از رونویس های الحاقی سنتز شده و هم RNA استخراج شده تهیه شد و سپس حساسیت هر دو تکنیک تعیین گردید. محصولات واکنش RT-PCR و NASBAبا نسبت برابری به ترتیب با DIG-11-dUTP و DIG-11-UTP نشاندار شد. بدنبال دناتوراسیون، واکنش هیبریداسیون با پروب اختصاصی روی هر دو محصول انجام شد. محصولات در میکروپلیت های پوشیده شده با استرپتواویدین انکوبه شد. پس از شستشو پلیت ها، آنتی دیگ کونژوگه با پراکسیداز اضافه و با استفاده از سوبسترا ATBS فعالیت آنزیمی در طول موج 405 نانومتر تعیین شد.یافته ها: اختصاصیت هر دو روش یکسان بود، اما حساسیت 100RT-PCR-ELISA برابر بیشتر از روش NASBA-ELISA بود. به عبارتی RT-PCR-ELISA توانست 100 پیگوگرم RNA کمتری را نسبت به 0/006) NASBA-ELISA در مقابل 06/0 پیکوگرم RNA) را شناسایی نماید. هم چنین میزان شناسایی سلول های لوسمیک توسط این دو روش به ترتیب 4 و 400 سلول بود.نتیجه گیری: با وجودی که NASBA به ترمال سیکلر نیازی ندارد، اما حساسیت آن کمتر از روش RT-PCR بوده و نمی تواند روش مناسبی برای ارزیابی کمی باشد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

مقایسه کمی حساسیت nasba-elisa و rt-pcr-elisa در اندازه گیری رونویس الحاقی ژن های bcr-abl بیماران مبتلا به cml

سابقه و هدف: بیماران مبتلا به لوسمی میلوئیدی مزمن (cml) دارای کرموزوم فیلادلفیا هستند. این کروموزوم حاصل جابجایی بازوهای بلند کروموزوم های 9 و 22 (q34q11) بوده که منجر به ایجاد الحاق بین ژنهای bcr و abl می گردد. در این مطالعه، تکنیک های rt-pcr و nasba در تعیین رونویس های bcr-abl مقایسه شد.روش بررسی: رونویس های الحاقی بطور مصنوعی سنتز و rna از رده سلولی لوسمیک k562 استخراج گردید. سریال رقت هم از...

full text

بررسی مقدماتی اثر دو روش درمانی بر بیان ژن BCR-ABL در بیماران مبتلا به CML

  چکید ه   سابقه و هدف   لوسمی میلوئید مزمن (CML) بیماری است که به دلیل موتاسیون اختصاصی در سلول‌های بنیادی چند قوه‌ای مغزاستخوان ایجاد می‌شود. وجود کروموزوم فیلادلفیا و عوامل ژنتیک در این بیماری برای نخستین بار در سال 1973 گزارش گردید. امروزه وجود محصول ژن اتصال یافته BCR-ABL که دارای فعالیت غیرطبیعی تیروزین کینازی است و موجب بی‌نظمی در تکثیر سلول‌ها می‌شود در این بیماری ثابت شده است. در این ب...

full text

Reproducibility in the quantification of mRNA levels by RT-PCR-ELISA and RT competitive-PCR-ELISA.

The use of reverse transcription (RT) PCR for relative quantitation of gene transcripts relies on the reproducibility of the individual RT, PCR and product measurement steps. Semi-competitive RT-PCR (RT-cPCR) uses an internal competitor template in the PCR step to improve quantitation. We have surveyed the reproducibility of RT, PCR, RT-cPCR and measurement, amplifying the glyceraldehyde-3-phos...

full text

بررسی مقدماتی اثر دو روش درمانی بر بیان ژن bcr-abl در بیماران مبتلا به cml

چکید ه سابقه و هدف   لوسمی میلوئید مزمن (cml) بیماری است که به دلیل موتاسیون اختصاصی در سلول های بنیادی چند قوه ای مغزاستخوان ایجاد می شود. وجود کروموزوم فیلادلفیا و عوامل ژنتیک در این بیماری برای نخستین بار در سال 1973 گزارش گردید. امروزه وجود محصول ژن اتصال یافته bcr-abl که دارای فعالیت غیرطبیعی تیروزین کینازی است و موجب بی نظمی در تکثیر سلول ها می شود در این بیماری ثابت شده است. در این بررسی...

full text

مقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure

کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...

full text

واریانت های bcr-abl در بیماران لوسمی میلوئیدی مزمن به روش rt-multiplex pcr

هدف: لوسمی (سرطان خون) میلوئیدی مزمن یک بیماری کلونال بدخیم سلول های پایه خون ساز است که نتیجه آن افزایش سلول های میلوئیدی، اریتروئیدی و پلاکت ها در خون محیطی و هیپرپلازی در مغز استخوان است. تحقیقات انجام شده واریانت های متفاوتی از bcr-abl را در بیماران لوسمی میلوئیدی مزمن نشان داده است. تاکنون در ایران صرفاً 3 واریانت در برخی از آزمایشگاه های تشخیص طبی شناسایی می شود که یکی از دلایل آن عدم طراح...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 18  issue 2

pages  67- 74

publication date 2008-07

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023