طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین CFP-10، ESAT-6 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس

Authors

  • تبرائی, بهمن مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
  • خان احمد شهررضا, حسین مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
  • رستمی, منوچهر مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
  • زره ساز, جواد دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده پزشکی، گروه باکتری شناسی
  • سهرابی, طیبه مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
  • فرناد, مرصع دانشگاه آزاد اسلامی، واحد زنجان
  • موثق, حسام مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
  • موخواه, رسول مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
  • پیر حاجتی مهابادی, رحیم دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده پزشکی، گروه باکتری شناسی
  • یزدان پناه, بهادر مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
Abstract:

زمینه و اهداف: در قرن گذشته تنها روش تشخیص عفونت نهفته مایکوباکتریوم توبرکولوزیس آزمایش پوستی توبرکولین بود. این آزمایش در بیماران آلوده با دیگر مایکوباکتریوم ها و در افراد واکسینه با BCG نتایج مثبت کاذب دارد. لذا، لزوم روش های تشخیصی کارآمد، سریع و دقیق مطرح می شود. دو آنتی ژن CFP-10و ESAT-6 در تمام مایکوباکتریوم های پاتوژن وجود دارد ولی در سویه های مولد واکسن BCGو مایکوباکتریوم های فرصت طلب از جمله مایکوباکتریوم  آویوم وجود ندارد. هدف این مطالعه ساخت سازه بیانی فیوژن پروتئین متشکل از دو ژن اختصاصی رمز کننده CFP-10و ESAT-6 بود. این فیوژن پروتیین در آزمایش اختصاصی تشخیص عفونت فعال و نهفته مایکو باکتریوم توبر کولوزیس به‌کار برده می‌شود. روش بررسی: ‌DNA مایکوباکتریوم توبرکولوزیس(H37Rv )استخراج و تعیین غلظت گردید. برای تکثیر قطعات ESAT-6 ، CFP-10 و قطعه شامل ESAT-6 و CFP-10 پرایمر طراحی گردید و PCR و Overlap PCR انجام شد. محصول PCR حاصل از فیوژن ESAT-6 و CFP-10 در پلاسمید pTZ57T/A کلون شد. سپس پلاسمید pQE-60 وpT-ESAT-CFP با دو آنزیم BamHI و NcoI هضم شد. محصول هضم آنزیمی روی ژل آگارز، الکتروفورز شد. باندهای DNA حاوی ESAT-CFP و pQE-60 خطی شده از ژل آگارز استخراج گردید. قطعه ESAT-CFP در pQE-60 کلون مجدد شد. کلون‌های به‌دست آمده با PCR، هضم آنزیمی وتعیین توالی ارزیابی گردید. پلاسمید نهایی pQ-ESAT-CFP نامیده شد. یافته ها: محصولات PCR، پلاسمید pT-ESAT-CFP و پلاسمید نهایی با هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شدند. نتیجه گیری : با بیان سازه ژنی pQ-ESAT-CFP و تخلیص فیوژن پروتئین حاصل می‌توان از آن برای ساخت کیت تشخیصی مایکوباکتریوم توبرکولوزیس، جایگزین آزمایش توبرکولین، استفاده کرد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین cfp-۱۰، esat-۶ مایکوباکتریوم توبرکولوزیس

زمینه و اهداف: در قرن گذشته تنها روش تشخیص عفونت نهفته مایکوباکتریوم توبرکولوزیس آزمایش پوستی توبرکولین بود. این آزمایش در بیماران آلوده با دیگر مایکوباکتریوم ها و در افراد واکسینه با bcg نتایج مثبت کاذب دارد. لذا، لزوم روش های تشخیصی کارآمد، سریع و دقیق مطرح می شود. دو آنتی ژن cfp-10و esat-6 در تمام مایکوباکتریوم های پاتوژن وجود دارد ولی در سویه های مولد واکسن bcgو مایکوباکتریوم های فرصت طلب ا...

full text

طراحی و ساخت پلاسمید نوترکیب حاوی ترکیب ژن‌های Ag85B و TB10.4 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس

Background & Aims: Tuberculosis (TB), caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb), remain as a leading causes of mortality among infectious diseases. The only current vaccine, bacillus Calmette-Gue´rin (BCG), displays highly variable efficiency for preventing tuberculosis. Thus, identification of protective antigens could be mentioned for designing new vaccines. Among different Mtb antigens,...

full text

طراحی و ساخت پلاسمید نوترکیب حاوی ترکیب ژن های ag۸۵b و tb۱۰.۴ مایکوباکتریوم توبرکولوزیس

پیش زمینه و هدف: علی رغم استفاده از واکسن ب.ث.ژ از سال 1921 تابه حال، هنوز بیماری سل به عنوان دومین عامل مرگ ومیر در بین بیماری های عفونی محسوب می گردد. با افزایش مقاومت عامل مولد سل (مایکوباکتریوم توبرکولوزیس) به آنتی بیوتیک های معمول و وسیع الطیف و همچنین با ظهور hiv و عفونت این ویروس با مایکوباکتریوم توبرکولوزیس، مقابله با این بیماری بیشتر به چالش کشیده شده است. شناخت آنتی ژن های مؤثر در ایم...

full text

مقایسه پاسخ‌های ایمنی همورال متعاقب تجویز آنتی‌ژن نوترکیب ESAT-6/CFP-10 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در سه مسیر مختلف

Introduction: Tuberculosis (TB) has been considered as a main health problems of the present century. Unfortunately, it has been reported different protective responses against BCG vaccine, as only available vaccine against TB .The search for a new and improved vaccine against tuberculosis is currently a very active field of research. In this study, we have evaluated the relative effects of int...

full text

Macrophage Immune Response Suppression by Recombinant Mycobacterium tuberculosis Antigens, the ESAT-6, CFP-10, and ESAT-6/CFP-10 Fusion Proteins

Background: Macrophage immune responses are affected by the secretory proteins of Mycobacterium tuberculosis (Mtb). This study aimed to examine the immune responses of macrophages to Mtb secretory antigens, namely ESAT-6, CFP-10, and ESAT-6/CFP-10.Methods: THP-1 cells (a human monocytic cell line) were cultured and differentiated to macrophages by phorbol 12-myristate 13-acetate. The cytotoxici...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 4  issue 3

pages  7- 13

publication date 2010-12

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023