شناسائی ژن شیگاتوکسین به‌وسیله روش Multiplex PCR
Authors
Abstract:
مقدمه: زیر گونه‌های Shiga toxin– producing E. coli) STEC ) و بیوتایپ 1 شیگلا دیسانتری باعث ایجاد اسهال، کولیت هموراژیک و ناهنجاری‌های بدخیم سیستم مجاری ادراری HUS ( Hemolytic Uremic Syndrome ) در انسان می‌شوند. بسیاری از نشانه‌های کل ی نیکی این بیماری در اثر تولید شیگا توکسین 1( Stx /Stx1 )، شیگا توکسین 2 ( Stx2 ) و یا مجموعه‌ای از هر دو نوع توکسین پدید می‌آید. این تحقیق جهت شناسا ی ی ژن این توکسین ها ب ه وسیله روش ملکولی صورت گرفته است. مواد و روش کار: برای شناسا ی ی ژنهای stx/stx1 و stx2 تکنیکی براساس Multiplex PCR به همراه ژن مالات دهیدروژناز ( mdh ) موجود در دو باکتری E. coli و شیگلا طراحی شده است. مجموعه‌ای از 6 پرایمر استفاده شده است: SFI و SRI یک قطعه bp 199 از ژن mdh را تولید می‌کنند که به عنوان یک کنترل مثبت ( Internal positive control ) برای صحت واکنش عمل می‌کند، Ka2R و Ka2F یک قطعه pb 381 از ژن stx2 را تولید و Ka1F و Ka1R یک قطعه pb 622 از ژن stx/stx1 را تولید کنن د. جهت تایید محصولات واکنش از فرآیند هضم آنزیمی و تعیین توالی استفاده شد. نتایج: محصولات PCR ژنهای stx/stx1 و stx2 و mdh تنها در E. coli O157:H7 به طور هم زمان مشاهده شد و در بیوتایپ 1 شیگلا دیسانتری تنها قطعه مربوط به stx/stx1 و mdh مشاهده گردید . در ژنوم تخلیص شده از دیگر باکتری‌های گرم منفی قطعات مربوط به توکسین مشاهده نشد. فرآیند هضم آنزیمی و تعیین توالی صحت قطعات تکثیر شده را مورد تایید قرار داد. حساسیت واکنش PCR برای شناسا ی ی ژن شیگا توکسین pg/ m l 1/2 از ژنوم باکتری و معادل cfu/ m l 320 بود. بحث: واکنش طراحی شده قادر به شناسا ی ی ژن های stx2 , stx/stx1 و mdh می باشد. E. coli O157:H7 قادر به تولید هر دو نوع شیگا توکسین و بیوتیپ 1 شیگلا دیسانتری تنها قادر به تولید نوع 1 شیگا توکسین می باشند. با بررسی های انجام شده بر روی قطعات تکثیر شده و مقایسه آن ها با بانک ژنوم مشخص شد که قطعه در نظر گرفته شده برای تکثیر stx2 در تمامی انواع این ژن وجود دارد، در نتیجه جهت شناسایی آن ها مناسب می باشد. این روش وسیله ای مناسب جهت تشخیص انواع شیگا توکسین ها می باشد چرا که سریع، اختصاصی، حساس و ارزان می باشد.
similar resources
شناسائی ژن شیگاتوکسین به وسیله روش multiplex pcr
مقدمه: زیر گونه های shiga toxin– producing e. coli) stec ) و بیوتایپ 1 شیگلا دیسانتری باعث ایجاد اسهال، کولیت هموراژیک و ناهنجاری های بدخیم سیستم مجاری ادراری hus ( hemolytic uremic syndrome ) در انسان می شوند. بسیاری از نشانه های کل ی نیکی این بیماری در اثر تولید شیگا توکسین 1( stx /stx1 )، شیگا توکسین 2 ( stx2 ) و یا مجموعه ای از هر دو نوع توکسین پدید می آید. این تحقیق جهت شناسا ی ی ژن این تو...
full textشناسایی ژن های انتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس با استفاده Multiplex PCR
سابقه و هدف: استافیلوکوکوس اورئوس یکی از مهمترین عوامل مسمومیت غذایی در جهان می باشد. در تحقیقات مختلف مشخص گردیده است که 18-15 درصد سویه های استافیلوکوکوس که از منابع مختلف جدا می شود قادر به تولید انتروتوکسین می باشند که فاکتور اصلی مسمومیت می باشند. هدف از تحقیق حاضر شناسایی ژنهای انتروتوکسین نظیر: (femA،see ،sed ،sec ،seg ،seb، sea) در استافیلوکوکوس اورئوس که با استفاده از روش PCR چندگانه ا...
full textشناسایی ژن پیووردین Pyoverdine در جدایه های دامی و انسانی سودوموناس آئروژینوزا با روش Multiplex-PCR
Background and Aim: Pseudomonas aeruginosa is one of the most important factors in hospital infections, especially in patients with immune deficiency and Childhood diseases. The Virulence of bacteria are due to the presence of the Pyoverdine gene, which has many effects on the wild type of bacteria during the pathogenic pathway. Identification of different classes of PVD gene is necessary for t...
full textشناسایی لشمانیوز پوستی با استفاده از روش Multiplex PCR
Introduction: Annually, more than 14 million people are reported to be infected with Leishmaniasis all over the world. In Iran, this disease is seen in the form of cutaneous and visceral leishmaniasis, of which the cutaneous form is more wide spread. In recent years, cutaneous leishmaniaisis is diagnosed by PCR utilizing specific primers in order to amplify different parasite genes including ri...
full textReal-time multiplex PCR assays.
The ability to multiplex PCR by probe color and melting temperature (T(m)) greatly expands the power of real-time analysis. Simple hybridization probes with only a single fluorescent dye can be used for quantification and allele typing. Different probes are labeled with dyes that have unique emission spectra. Spectral data are collected with discrete optics or dispersed onto an array for detect...
full textSelecting Degenerate Multiplex PCR Primers
Single Nucleotide Polymorphism (SNP) Genotyping is an important molecular genetics technique in the early stages of producing results that will be useful in the medical field. One of the proposed methods for performing SNP Genotyping requires amplifying regions of DNA surrounding a large number of SNP loci. In order to automate a portion of this method and make the use of SNP Genotyping more wi...
full textMy Resources
Journal title
volume 7 issue 4
pages 321- 329
publication date 2006-01
By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.
No Keywords
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023