جداسازی متانوبروی باکتر اسمیتی از نمونه مدفوع انسان با استفاده از ژن اختصاصی rpoB

سابقه و هدف: آرکی­ها میکروارگانیسم­های اکستروترموفیل هستند که سال­ها تصور بر آن بود که تنها می­توان آنها از محیط­های با شرایط دشوار از قبیل آتشفشان­ها ، اعماق اقیانوس­های و دریاچه­های پرنمک به دست آورد. اما امروزه مشخص شده است که دسته­ای از این آرکی­ها ساکن دستگاه گوارش موجودات زنده از قبیل پستانداران، سخت پوستان و انسان هستند. از مهم­ترین سویه شناسایی شده آرکی­ها در دستگاه گوارش، می توان بهMethanobrevibacter smithii   اشاره کرد. در این مطالعه، برای اولین بار آرکی متانوژن به صورت بومی جداسازی شد. روش بررسی: در این مطالعه DNA آرکی از نمونه های مدفوع 20 فرد سالم با معیار های مورد نظراستخراج  و سپس PCR  آن در شرایط بهینه صورت گرفت، همچنین برای اطمینان از تکثیر ژن مورد نظر (rpoB) هضم آنزیمی توسط آنزیم محدودکننده انجام شد و در انتها نمونه ها در داخل E.coli(DH5α) کلون و تعیین توالی شدند. یافته­ ها: از بین 20 نمونه مدفوع، در 18 نمونه جواب PCR (90%) مثبت گزارش شد. جواب­های مثبت به کمک آنزیم محدودالاثر AVAII تایید شدند و نتایج سکانس در سایت NBCI بررسی شد و مشخص شد نمونه جدا شده آرکی Methanobrevibacter smithii  است. نتیجه­گیری: این مطالعه نشان می­دهد با توجه به  تنوع میکرورارگانیسم­ها در دستگاه گوارش، تعیین ژن اختصاصی و عدم داشتن همولوژی با سایر میکروارگانیسم­ها در جداسازی آرکی بسیار حایز اهمیت است. واژگان کلیدی: متانوبروی باکتر اسمیتی، آرکی، مدفوع ، ژن rpoB.