بهینه‌سازی تولید فعال‌کننده پلاسمینوژن بافتی نوترکیب در انگل لیشمانیای غیر بیماری‌زا با طراحی دو سازۀ ژنی

Authors

برخورداری, فرزانه گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران

حمایتکار, مهدی گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران

داوودی, نوشین گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران

دوامی, فاطمه گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران

مجید زاده اردبیلی, کیوان گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران

مهبودی, فریدون گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران

Abstract:

Background: Recombinant tissue plasminogen activator (rt-PA) is one of the most important thrombolytic agentsused in patients with vascular occlusions such as acute ischemic stroke or myocardial infarction. A variety of recombinant protein expression systems have been developed for heterologous gene expression in prokaryotic and eukaryotic hosts. In recent years, Leishmania tarentolae (L. tarentolae), a non-pathogenic trypanosomatid protozoa, has come under consideration because of its safety and immunogenicity as a vaccine vector and special attributes in the expression of complex proteins. This study was done to improve rt-PA expression in this protozoon and create the opportunity for the replacement of rt-PA gene with other genes for the production of other complex proteins. Methods: Two expression cassettes were used for the integration of two copies of t-PA cDNA, one copy in each cassette, into the parasite genome by electroporation. The transformed clones were selected by antibiotic resistancy. The expression of active secreted rt-PA was confirmed by Western blot analysis and Chromolize assay. Results: Appearance of a 64 kD band in nitrocellulose membrane in the Western blot analysis confirmed the presence of full-length rt-PA in the culture media. Chromolize assay showed the expression levels of active recombinant t-PA in single and double transfected L. tarentolae clones- 375 IU/ml and 480 IU/ml of the culture media,respectively. Conclusion: The produced rt-PA in the culture media containing the transfected cells was at least seven times higher than what has been reported in previous studies on L. tarentolae or on some other eukaryotic systems.

Upgrade to premium to download articles

Already have an account?login

similar resources

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...

full text

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

full text

مراقبتهای پرستاری دردرمان با فعال کننده پلاسمینوژن بافتی

The main therapeutic objective of emergency after acute myocardial infarction (MI) is limiting the infarcted area through the opening of occluded artery, decreasing demand of myocardial oxygen and preventing MI complications.When arterial wall is injured, the collagen tissue is exposed to platelet aggregation that leads to releasing adenosine 5 diphosphate and subsequent to it, platelet adhesio...

full text

طراحی کاست ژنی، کلونینگ و بیان پلی‌پپتید شبه الاستین نوترکیب به منظور تولید بیومتریال کاربردی در مهندسی بافت

سابقه و هدف: پلی‌پپتید شبه الاستین (Elastin-like polypeptide, ELP) بیومتریال مصنوعی برگرفته از توالی پنتاپپتید Val-Pro-Gly-Xaa-Gly (VPGXG) الاستین ماتریکس خارج سلولی (ECM) است. پلیمرهای پروتئینی که از واحدهای تکراری اسیدهای آمینه طبیعی و غیرطبیعی پدید می‌آیند، به‌عنوان رده‌ای جدید از بیومواد شناخته می‌شوند. ویژگی‌های منحصر به فرد ELP همانند تولید بر پایه بیان ژنتیکی در انواع رده‌های میزبانی (...

full text