In vitro culture of Phyllanthus stipulatus (Euphorbiaceae)

(In vitro culture of Phyllanthus stipulatus (Euphorbiaceae)). An efficient micropropagation protocol was developed for the medicinal plant Phyllanthus stipulatus (Euphorbiaceae) using nodal segments for axillary shoot proliferation. Maximum multiplication rates (8-9 shoots per explant) was achieved on MS media supplemented with either 2.5-5.0 μM IBA. The best basal media for axillary shoot proliferation when 0.62μM BA was supplemented were MS, MS/2 and AR (4-5 shoots per explant). Rooting was achieved with 100% of the microshoots on MS medium without growth regulators. Regenerated plants were successfully acclimatized and about 88% of plantlets survived under ex vitro conditions. Flowering was observed in 81% of the ex vitro grown plantlets after 12 weeks of acclimatization. High frequency callus initiation and growth was achieved when nodal segment explants were inoculated either in the vertical position, in the light on MS medium supplemented with 5.0 μM NAA or horizontally oriented, in the dark on MS supplemented with 5.0 μM NAA or 1.25-5.0 μM BA or 2iP. Root cultures were successfully established on MS medium containing 1.1 μM NAA. The optimized micropropagation, callus and root culture protocols offer the possibility to use cell/organ culture techniques for vegetative propagation and secondary metabolism studies. RESUMO (Cultura in vitro de Phyllanthus stipulatus (Euphorbiaceae)). Um eficiente protocolo de micropropagação foi desenvolvido para a espécie medicinal Phyllanthus stipulatus (Euphorbiaceae) através da utilização de segmentos nodais para a proliferação de ramos. Taxas máximas de multiplicação (8-9 ramos por explante) foram obtidas em meio MS suplementado com 2,5-5,0 μM de IBA. As melhores formulações de meios de cultura quando 0,62 μM de BA foi suplementado foram MS, MS/2 e AR (4-5 ramos por explante). O enraizamento foi obtido em 100% das microestacas em meio MS sem reguladores de crescimento. As microplantas regeneradas foram aclimatadas com successo e ao redor de 88% delas sobreviveram às condições ex vitro. A floração foi observada em 81% das microplantas crescidas ex vitro 12 semanas após a aclimatação. Altas freqüências de iniciação e crescimento de calos foram obtidas quando os segmentos nodais foram inoculados na posição vertical, na luz, no meio MS suplementado com 5,0 μM NAA ou na posição horizontal, no escuro em meio MS suplementado com 5,0μM NAA or 1,25-5,0μM de BA ou 2iP. Culturas de raízes foram estabelecidas em meio MS suplementado com 1,1 μM NAA. Os protocolos otimizados de micropropagação, cultura de calos e de raízes possibilitam a utilização das técnicas de cultura de células/órgãos para a propagação vegetativa e estudos sobre o metabolismo secundário.