همسانه سازی هدف دار ژن gfp به عنوان رهیاب و فیوژن آن با واسطه لینکر انعطاف پذیر prarr به ژن های واکسن کایمریک ctb-stb

مقدمه و هدف: ژن های گزارشگر وسیله ای مناسب برای مطالعه بیان سایر ژن ها هستند. gfp به عنوان یک گزارشگر، پروتئینی است که زیر تابش فرابنفش از خود نور سبز روشن گسیل می کند. هدف از این تحقیق اتصال ژنگزارشگر gfp به ژن های انتقال دهنده و ادجوانت ctxb و stxb می باشد. لینکر مورد استفاده مابین ژن های متصل شده، توالی نوکلئوتیدی برای ساخت توالی آمینواسیدی prarr(pro- arg-ala-arg-arg) می باشد. کاست ژنی ساخته شده می تواند واکسن موثری بر علیه دو بیماری شیگلوز و وبا باشد. مواد و روش بررسی: پرایمرهای مورد نیاز برای ژن های gfp،ctxb و stxb، طراحی و تهیه شد. با استفاده از تکنیک pcr برای تکثیر ژن ها اقدام شد. ژن های تکثیر شده در وکتور pgem-t easy vector همسانه سازی و پس از تایید قطعات ژنی به یکدیگر اتصال یافتند. به این منظور در پرایمرهای ژن gfp دو لینکر انعطاف پذیر طراحی و قرار داده شد. نتایج: ژن های تکثیر شده در وکتور pgem-t easy vector همسانه سازی شدند و با استفاده از روش pcr ، pcr داخلی، برش آنزیمی و دستگاه توالی یاب مورد تایید قرار گرفتند. قطعات ژنی تایید شده به ترتیب ctxb –gfp-stxb به یکدیگر اتصال یافتند. بحث: کاست ژنی ctxb-gfp-stxb حامل ژن گزارشگر gfp می باشد. بنابراین زیر همسانه سازی آن در وکتور میزبان های مختلف و بیان آنها امکان رهگیری عملکردی ژن ها در شرایط آزمایشگاهی و طبیعی را به وجود خواهد آورد.