ارایه روشی نوین در تولید آنتی‏بادی اختصاصی با استفاده ترتیبی از پروتئین نوترکیب و پپتید (مدل pripep)

هدف به‏دست آوردن آنتی‏بادی اختصاصی با ایمن‏سازی توسط پروتئین نوترکیب و خالص‏سازی به کمک پپتید مصنوعی به‏عنوان روشی جدید (مدل pripep). مواد و روش ها: آنتی‏ژن پروتئینی با همسانه‏سازی ژن کامل sry روی ناقل pet28a و بیان پروتئین نوترکیب آن در سویه bl21 باکتری اشریشیا کلی تولید شد. پپتیدی اختصاصی از این پروتئین نیز طراحی و پس از سنتز برای ساخت ستون خالص‏سازی استفاده شد. پروتئین نوترکیب در ادجوانت فروند به‏صورت امولسیون در آمد و طبق جدول زمانی استاندارد برای ایمن‏سازی در خرگوش به‏کار رفت. به‏عنوان شاهد، پپتید سنتز شده به پروتئین حامل klh کونژوگه و مانند پروتئین نوترکیب برای ایمن‏سازی استفاده شد. برای بررسی نتایج، ابتدا درستی ایمن‏سازی به‏وسیله روش الایزا بررسی شد. سپس آنتی‏سرم حاصل از تزریق پروتئین نوترکیب (pro-antisera) با استفاده از ستون خالص‏سازی شامل پپتید کونژوگه به سفارز خالص‏سازی شد (مدل pripep). آنتی‏سرم حاصل از تزریق پپتید کونژوگه به klh (pep-antisera) نیز با همین ستون خالص‏سازی شد. در نهایت، اختصاصیت و حساسیت آنتی‏بادی‏های خالص شده نسبت به پروتئین نوترکیب sry و همچنین چند شاهد منفی (پروتئین نوترکیب hsfy، rbmy و rps4y) با استفاده از روش لکه‏گذاری وسترن بررسی شد. نتایج: تیتراسیون با روش الایزا نشان داد که ایمن‏سازی برای هر 2 نوع آنتی‏ژن به‏خوبی و به‏طور اختصاصی انجام شد. همچنین تجزیه و تحلیل آنتی‏بادی‏های خالص کلاس igg با روش لکه‏گذاری وسترن نشان داد که اختصاصیت و حساسیت آنتی‏بادی در هر دو گروه مناسب است. نتیجه گیری: نتایج بررسی حاضر نشان داد که با استفاده از مدل pripep می‏توان از یک سو به آنتی‏بادی‏های اختصاصی دست یافت که علیه ساختار طبیعی پروتئین تولید شده‏اند و از سوی دیگر از چالش‏های کونژوگاسیون پپتید به پروتئین حامل اجتناب کرد.