اندازه گیری آنتی بادی تولید شده علیه کپسول پلی ساکاریدی پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات استخراج شده از هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b سویه ی محلی atf۲ با روش enzyme-linked immunosorbent assay (elisa)
نویسندگان
چکیده
مقدمه: هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b (hib یا haemophilus influenza b) یک ارگانیزم کپسول دار و عامل اصلی مننژیت در کودکان در جهان می باشد. آنتی ژن کپسول پلی ساکاریدی hib یک پلیمر تکراری از ریبوزیل ریبیتول فسفات و مهم ترین عامل ویرولانس و مسبب عفونت های بسیار در کودکان زیر 5 سال به خصوص کودکان زیر 2 سال می باشد. کپسول پلی ساکاریدی کانژوگه با یک حامل پروتئینی، در جلوگیری از چنین عفونت هایی بسیار مؤثر است. روش ها: در این مطالعه، hib سویه ی atf2 جدا شده از یک کودک مبتلا به مننژیت، در فرمانتور حاوی محیط اصلاح شده ی giolitti-cantoni broth (gc broth) کشت داده شد. کشت حاصل، بعد از غیر فعال شدن با استفاده از روش های مختلف تخلیص و آنتی ژن پلی ساکاریدی (prp یا polyribosylribitolphosphate) تهیه شده بعد از عبور از فیلتر 25/0 میکرومتری با توکسوئید کزاز (tt یا tetanus toxoid) به عنوان حامل پروتئینی کونژوگه گردید. محصول کونژوگه، پس از عبور از ژل سفارز cl-4b جداسازی شد و به عنوان محصول کونژوگه prp-tt مورد استفاده قرار گرفت. یافته ها: مقدار prp موجود در محصول کونژوگه 402 میکروگرم از 10 9 باکتری در هر میلی لیتر تخلیص شد. مقدار پروتئین و اسیدنوکلئیک موجود در prp مطابق با مقدار توصیه شده توسط world health organization (who) زیر 1 درصد بود. بازیافت prp موجود در محصول کونژوگه بعد از استفاده از sodium deoxycholate (doc)، 58 درصد بود که نشان دهنده ی مقدار بالای اتصال prp و پروتئین اولیه بود. پاسخ آنتی بادی علیه محصول کونژوگه (prp-tt) تهیه شده در نوزاد رت با نژاد ویستار با روش enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) غیر مستقیم اندازه گیری و بالاترین تیتر برای محصول کونژوگه نسبت به prp استخراج شده در آزمایشگاه و prp استاندارد خریداری شده از مؤسسه ی بین المللی استانداردهای بیولوژی در لندن (national institute for biological standards and control یا nibsc) به دست آمد. در تیتر آنتی بادی به دست آمده برای prp تخلیص شده و خریداری شده از nibsc در غلظت برابر آنتی ژن و رقت 200/1 آنتی بادی شباهت زیادی دیده شد که این نشانگر خلوص prp تهیه شده در آزمایشگاه می باشد. نتیجه گیری: روش تخلیص prp، کونژوگاسیون و ایمنی زایی محصول کونژوگه در مدل حیوانی نوزاد رت روشی مقرون به صرفه و عملی با خلوص بالا است که می توان از آن درتولید واکسن hib با حجم بالا (scale up) استفاده کرد.
منابع مشابه
The ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay.
Featured Article: Engvall E, Perlmann P. Enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochemistry 1971;8:871– 4. This paper was my first as a graduate student of Professor Peter Perlmann at Stockholm University. At the time, RIAs were in full bloom, but they were too sophisticated for many areas of research and diagnosis because they required expensive e...
متن کاملEnzyme immunoassay (EIA)/enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
This brief note addresses the historical background of the invention of the enzyme immunoassay (EIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). These assays were developed independently and simultaneously by the research group of Peter Perlmann and Eva Engvall at Stockholm University in Sweden and by the research group of Anton Schuurs and Bauke van Weemen in The Netherlands. Today, fully a...
متن کاملبررسی سرولوژیکی هموفیلوس آنفلوانزا تیپ b در کودکان زیر ۶ سال در شهر خرم آباد، ایران
مقدمه و هدف: هموفیلوس آنفلوانزا تیپ b یکی از عوامل مهم مننژیت باکتریال در کودکان در آسیا محسوب می شود. کپسول پلی ساکاریدی ریبیتول ریبوزیل فسفات (prp) در تمامی سویه ها وجود دارد و می تواند هدف آنتی بادی های igg باشد. با توجه به مطالعات محدود در مورد هموفیلوس آنفلوانزا تیپ b در کشور و نبود اطلاعات کافی در خصوص وضعیت ناقلین، دستیابی به یک الگوی جامع از شیوع این باکتری در مستعد ترین ناقلین یعنی کود...
متن کاملImmunodiagnosis of Haemonchus contortus infection in sheep by indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)
Indirect plate enzyme-linked immunosorbent assay was standardized and evaluated for its effectivenessin immunodiagnosis of haemonchosis in experimental and clinical cases in sheep by using somatic wholeadult antigen of H. contortus. Plate ELISA was standardized using 5 μg/well antigen concentration with1:100 and 1:1000 of sera and conjugate dilution. Indirect plate ELISA was able to demonstrate...
متن کاملAmphotericin B enzyme-linked immunosorbent assay.
Our purpose was to develop and characterize an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) which could measure the concentration of amphotericin B in serum. Amphotericin B was assayed by competition ELISA. Multiwell ELISA plates coated with amphotericin B (1.0 micrograms/ml) conjugated to bovine serum albumin were used to test replicates of serum samples spiked with amphotericin B. Purified rabbi...
متن کاملتولید آنتی بادی پلی کلونال علیه ژیاردیا لامبلیا در خرگوش
چکیده مقدمه: ژیاردیا لامبلیا یکی از شایع‌ترین تک یاخته‌های روده‌ای انسان در سراسر جهان می‌باشد. تشخیص آن عمدتاً از طریق مشاهده مستقیم صورت می‌گیرد ولی روشهای مبتنی بر ELISA، IFA، بعنوان تکنیکهای برتر، کاربردهای تحقیقاتی و اپیدمیولوژیکی دارد. برای طراحی تستهای قدرتمند با قدرت تشخیصی بالا نظیر دیپ استیک و یا کیت‌های تشخیصی سریع، اولین قدم تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال می‌باشد. لذا بر آن شدیم تا آنت...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشکده پزشکی اصفهانجلد ۳۴، شماره ۳۷۵، صفحات ۲۳۸-۲۴۴
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023