آنزیم آلفا آمیلاز از سویه باکتریایی bacillus sp.kr8104 از 422 اسید آمینه تشکیل شده و 48 کیلو دالتون جرم دارد. این آنزیم یک آنزیم ترشحی میباشد که توسط این سویه به فضای خارج سلولی ترشح میشود. این آنزیم دارای دو فرم بالغ و نابالغ می باشد. آیا آنزیم آمیلاز به صورت نابالغ توسط باکتری ترشح میشود و سپس در محیط خارج سلولی بالغ میشود یا به صورت بالغ به خارج از سلول ترشح میشود؟ سوالی است که در مورد این آنزیم مطرح شده است. با تهی? آنتی بادی مونوکلونال علیه فرم های مختلف آلفا آمیلاز از سویه باکتریایی bacillus sp.kr8104 و استفاده از آن به عنوان ابزار تشخیص در تست های ایمیونولوژی نظیر elisa و immunoblot می توان به این سوال جواب داد. در این مطالعه پس از 3 نوبت تزریق زیر پوستی آلفا آمیلاز به 5 موش از نوع balb/c و تعیین تیتر آنتی بادی اختصاصی با روش الایزا، با به کارگیری پلی اتیلن گلیکول 1500، سلول های لنفوسیت موش های ایمن شده با سلول های میولما sp2/0 ادغام شدند. سپس سلول های به دست آمده از مرحله ی قبل، در محیط کشت حاویhat و سرم 20% کشت داده شدند و بعد از 2 هفته 117 کلون هیبریدوما به دست آمد. برای تشخیص و انتخاب هیبریدوماهای با توانایی ترشح آنتی بادی علیه قطعه یc-terminal موجود در آلفا آمیلاز از bacillus sp. kr-8104 و آنزیم بالغ آلفا آمیلاز bacillus sp. kr-8104 الایزا روی محیط کشت روی کلون های حاصل انجام شد، که بین کلون ها یک کلون با توانایی ترشح آنتی بادی علیه قطعه ی c-terminal موجود در آلفا آمیلاز از bacillus sp. kr-8104 و یک کلون با توانایی ترشح آنتی بادی علیه آنزیم بالغ انتخاب شد. با روش رقیق سازی محدود یک کلون پایدار در تولید آنتی بادی مونوکلونال مورد نظر به دست آمد. آن گاه سلولهای هیبریدوما برای بررسی های بیش تر تقسیم و فریز شد. کلمات کلیدی: قطعهc-terminal آنزیم آلفا آمیلاز، هیبریدوما، آنتی بادی مونوکلونال