باکتری کلبسیلا پنومونیه (klebsiella pneumoniae) سروتیپ k2، یکی از پاتوژن¬های رایج در میان باکتری¬ های گرم منفی از خانواده انتروباکتریاسه می باشد. به دلیل شیوع بالای سروتیپ k2، ارائه روش تشخیصی دقیق، موثر و اختصاصی برای شناسایی این باکتری ضروری است. در طول چند سال گذشته، روش¬های مولکولی مانندpcr ، بیوسنسور نانو ذرات طلا و شناساگر¬های متصل به آن به منظور تشخیص سریع، دقیق، آسان، ارزان و با اختصاصیت و حساسیت بالا برای شناسایی پاتوژن¬های انسانی، گیاهی و حیوانی توسعه یافته اند. در این پژوهش، به منظور تشخیص سروتیپ k2 باکتری کلبسیلا پنومونیه از ژن¬هایk2a ، rmpa وorf10 استفاده گردید. طراحی پرایمر انجام و شناسایی باکتری توسط روش¬های pcr برای هر سه ژن و multiplex pcr برای ژن¬های orf10و k2a انجام شد. ژن k2a توالی¬یابی و به منظور طراحی شناساگر¬های تیول¬دار مورد استفاده قرار گرفت. سنتز نانوذرات طلا با قطر حدود 20 نانو متر انجام شد و از dna ژنومی سروتیپ k2 باکتری کلبسیلا پنومونیه به منظور تشخیص توسط نانو ذرات طلا و شناساگر¬ها استفاده گردید. تکثیر قطعه به اندازه bp 532 از ژنk2a با حساسیت 1 پیکوگرم و bp 309 از ژن orf10 با حساسیت 0/07 نانو گرم در تکنیک¬هایpcr و multiplex pcr مشاهده و در ژن rmpa باندی مشاهده نگردید. تغییر رنگ نانوذرات طلا در حضور dna ژنومی سروتیپ k2 و شناساگر¬ها مشاهده شد و بیشترین تغییر طول موج در محدوده 550 تا 650 نانومتر صورت پذیرفت. بنابراین می¬توان این روش را به عنوان روشی سریع، دقیق، ارزان و با اختصاصیت بالا نسبت به روش¬های بیوشیمیایی و مولکولی برای تشخیص سروتیپ k2 باکتری کلبسیلا پنومونیه معرفی نمود.

طبق روشهای متداول و استانداردهای موجود، جهت شناسایی باکتریهای بیماریزا لازم است که ابتدا 25 گرم ماده غذایی در 225 سی سی محیط کشت مایع، کاملا یکنواخت شده و سپس به مدت 24-72 ساعت، در دمای 30-37 درجه سانتی گراد، گرم خانه گذاری شود. انجام مراحل فوق ضروری است که تحت عنوان "پیش غنی سازی" و "غنی سازی" مطرح است. همین امر منجر به طولانی شدن زمان شناسایی این باکتریها به مدت 5 تا 10 روز کاری می شود. حتی در مواردیکه از روشهای مولکولی مانند pcr جهت تشخیص باکتریهای بیماریزای مواد غذایی استفاده می شود، اعمال مراحل پیش غنی سازی و غنی سازی ضروری است.در تحقیق حاضر، دو مرحله وابسته به کشت، کاملا حذف شده و به جای آن از بافرهایی با ph قلیایی استفاده شده است .