نام پژوهشگر: فرجالله شهریاری
نرگس علیزاده تمام محمد فارسی
یکی از موانع مهم در زمینه تکثیر گیاهان سرخدار این است که خواب بذور گونه¬های تاکسوس پدیده¬ای¬ معمول بوده و باززایی طبیعی این گیاهان با مشکلات زیادی همراه است. تکنیک کشت جنین، شیوه¬ای مناسب جهت به دست آوردن گیاهچه¬های تاکسوس می¬باشد و به عنوان ابزاری کارا جهت غلبه بر خواب دانه¬ها، کوتاه کردن دوره اصلاحی، تولید گیاهان عاری از آلودگی و متعاقب آن استحصال داروی ضد سرطان تاکسول مطرح است. به¬منظور بهینه¬سازی ترکیب محیط کشت جنین¬ها، آزمایشی فاکتوریل با چهار فاکتور (نوع محیط کشت، غلظت ذغال فعال و آگار در محیط کشت و مدت زمان اعمال پیش تیمار سرما) در قالب طرح کاملا تصادفی با چهار تکرار انجام گرفت. نتایج نشان داد که کشت جنین¬های بدون آندوسپرم که به مدت دو روز قبل از کشت در معرض سرما (cº4+( قرار گرفته بودند در محیط کشت جامد ms غنی شده با پنج گرم بر لیتر ذغال فعال همراه با یک گرم بر لیتر عصاره مخمر و 0/1 گرم بر لیتر اسیدآسکوربیک، بالاترین نرخ جوانه¬زنی جنین¬ها (97/7%) را باعث شد. آنالیزهای مورفولوژیکی پس از سه ماه نشان داد که همین تیمار مناسب¬ترین محیط جهت رشد ریشه و اندامهای هوایی می¬باشد. در آزمایشات بعدی، ساقه¬های جوان سرخدار معمولی جهت مقایسه اثرات نوع محیط کشت، تنظیم¬کننده¬های رشد، کربوهیدراتها، نیتروژن آلی، غلظت ویتامین¬ها و نسبت آمونیوم به نیترات در محیط کشت مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج نشان داد که محیط کشت b5 + 1% ساکارز + 1% فروکتوز + غلظت دو برابر ویتامینها و ترکیب هورمونی 1 میلی¬گرم در لیتر پیکلورام + 0/1 میلی¬گرم در لیتر کینتین، به اضافه یک میلی¬مولار از هریک از اسیدهای آمینه آرژنین، گلایسین و آسپارتیک اسید، رشد کالوس¬ها را نسبت به بقیه تیمارها به¬طرز معنی¬داری افزایش داد. تجمیع فاکتورهای ذکرشده در محیط کشت نهایی، میانگین وزن تر کالوس¬ را پس از یک ماه به 0/85 گرم رسانید. نتایج کشت ریزنمونه¬های (ساقه) برگرفته از گیاهچه¬های استریلی که از طریق کشت جنین به¬دست آمده بودند و کشت آنها در بهترین محیط کشت حاصل از انجام آزمایشات قبلی (b5 تغییر یافته)، سبب شد که ظرف مدت چهار روز در 100% نمونه¬ها کالوس القاء شود که به طرز معنی¬داری با ریز¬نمونه¬های برگرفته از گیاهان رشد یافته در طبیعت متفاوت بود
احمدفرهاد طالبی فاطمه واحدی
بروسلوز با بیش از نیم میلیون مورد گزارش سالانه بیماری، از شایع ترین بیماری های مشترک بین انسان و دام می باشد. در جهت ساخت واکسنی ایمن و بدون عوارض جانبی بر علیه این بیماری، کلونینگ ژن یکی از شاخص های مهم ایمنی زایی به نام omp31 در باکتری اشریشیا کلی به عنوان هدف این مطالعه در نظر گرفته شد. در این پژوهش پس از جداسازی و تکثیر قطعه ژنیomp31 از باکتری بروسلا ملی تنسیس سویه ی revi با استفاده از روش pcr، این ژن برای درج در ناقل بیانی pet32b(+) آماده گردید. سپس سازه ژنی pet32b(+)-omp31 به داخل باکتری اشریشیا کلی سویه bl21 وارد شد. برای تولید پروتئین از القا پلاسمید توسط iptg استفاده گردید. پروتئین نوترکیب توسط متیل افینیتی کروماتوگرافی ni-nta خالص گردیده و به روش براد فورد میزان آن تعیین گردید. ترادف نوکلئوتیدی ژن کلون شده در ناقل pet32b(+) با ژن omp31 بروسلا ملی تنسیس مطابق بود. پروتئین نوترکیب omp31 بصورت یک فیوژن پروتئین با وزن مولکولی 47 کیلو دالتون و با 6x his tag در دو انتها، عمدتاً در فاز نامحلول، بیان گردید. در شرایط بهینه برای تولید پروتئین، ، عملکردی در حدود 0/4 میکروگرم پروتئین خالص به ازای 20 میلی لیتر محیط کشت بدست آمد. پروتئین نوترکیب omp31 در باکتری اشریشیا کلی به صورت یک پروتئین فیوژن تولید و خالص گردیده و جهت مطالعات بیوشیمیایی و آنتی ژنیک بعدی در اختیار است.