کلستریدیوم پرفرینجنس مسئول ایجاد بیماری­های زیادی در انسان و حیوانات می­باشد. این باکتری پنج تیپ مختلف دارد که هر کدام بیماری­های خاصی را موجب می­شوند. جهت تشخیص تیپ­های­ مختلف این باکتری روش­های متفاوتی وجود دارد که اکثراً دشوار، زمان­بر و پرهزینه هستند و از حساسیت و اختصاصیت پایینی نیز برخوردارند. هدف از انجام این تحقیق استفاده از روش­های پیشرفته مولکولی جهت شناسایی ژنوتیپ­های مختلف باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس در شهرستان کرمان می­باشد. متأسفانه تاکنون هیچگونه تحقیق مستندی در این رابطه در ایران انجام نشده است. در این مطالعه 270 نمونه مدفوع از گوسفندان 20 روستا در اطراف کرمان به طور تصادفی و در دو مرحله گرفته شد. پس از فرآوری و کشت نمونه­ها، کلونی­های حاصل از نظر مورفولوژی و رنگ­آمیزی بررسی شدند و با استفاده از آزمون­های بیوشیمیایی، گونه­های آنها شناسایی شد. آزمایش­های بیوشیمیایی انجام شده عبارت بودند از: آزمایش کاتالاز، هیدرولیز ژلاتین، هیدرولیز لستین، آزمون لیپاز، آزمون تولید اندول، آزمایش حرکت، واکنش شیر تورنسل دار و تخمیرکربوهیدرات­ها (ساکارز، گلوکز، لاکتوز و مالتوز). کلستریدیوم­های جدا شده در این تحقیق 30 درصد نمونه­ها را شامل می­شدند که عبارت بودند از کلستریدیوم­های پرفرینجنس، باراتی، ابسونیوم، بیفرمنتانس، اسپورجنس، لپتوم، اورانتی­بوتریکوم، اسپوراسفیریدس، سیمبی­زوم، اسکاتولوجنس، راموزوم و سردلی. استخراج dna بر روی تمام گونه­های کلستریدیوم جدا شده انجام شد. جهت تعیین تیپ باکتری­های جدا شده، از آزمون pcr با پرایمرهای اختصاصی هر تیپ استفاده گردید. تیپ­های جدا شده باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس شامل 17/39% تیپ a، 21/74% تیپ b، 34/78% تیپ c، و 26/09% تیپ d بود که تیپ a برای اولین بار در ایران شناسایی گردید. در مطالعه­ای بین نمونه­های نگهداری شده در یخچال و نمونه­های تازه، اختلاف معنی­دار زیادی (p<0/01) در جداسازی کلستریدیوم­ها مشاهده شد. همچنین تأثیر تزریق واکسن آنتروتوکسمی بر جداسازی گونه­های مختلف کلستریدیوم­های روده­ای بررسی شد و نتایج حاصله اثر معنی­دار زیاد واکسیناسیون (p<0/01) روی کاهش جداسازی گونه­ی کلستریدیوم پرفرینجنس را نشان می­دهد.

باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ a یک تولید کننده سم آلفا¬توکسین می باشد که عامل ایجاد بیماری گازگانگرن است. این بیماری یک عفونت تهدید کننده حیات با تب، درد، ورم میکرونکروز و تولید گاز می باشد. پروتئین آلفا توکسین دارای فعالیت های فسفولیپازی و اسفنگولیومینازی می باشد که همولیز، مرگ و نکروز پوستی را سبب می شود. اثر کشندگی آلفا توکسین نیز به خاطر تخریب غشای سلولی می باشد به همین جهت این سم نقش مهمی در ایجاد قانقاریای گازی دارد. هدف از انجام این پژوهش، تکثیر و همسانه سازی ژن کشنده آلفا¬توکسین(α-toxin) باکتری کلستریدیوم پرفرِینجنس در باکتری e.coli بود. جهت مطالعه ژن کدکننده آلفاتوکسین، استخراجdna ژنومی با استفاده از کیت کیاژن صورت گرفت سپس با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن با استفاده از تکنیک pcr تکثیر و در ناقل e.colipet28a کلون شد. با استفاده از هضم آنزیمی توسط آنزیم های hindiii و xhoi کلون مورد نظر تأیید شد. با توجه به موفقیت آمیز بودن کلونینگ ژن آلفا¬توکسین در باکتری های میزبان می توان گفت که اولأ پرایمرهای طراحی شده برای تکثیراین ژن اختصاصی اند، ثانیأ به عنوان یک مارکر جهت شناسایی و طبقه بندی این باکتری ها می توانند مورد استفاده واقع شوند. ثالثأ با ساخت واکسن های نوترکیب ژنتیکی مهندسی شده می توان راه کنترل و مقابله با پاتوژن های مهمی همچون باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس را امکان پذیر ساخت.